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浅论病毒鸭坦布苏病毒分离鉴定及其生物学特性的论文封面格式范文
剪切位点和N连接糖基化位点,结果可见该病毒不同蛋白之间剪切位点与同种属的其他病毒具有一定的保守性。                  关键词:鸭坦布苏病毒奉贤2010(FX2010)株论文  分离论文  鉴定论文  生物学特性论文本论文由http://www.qqg88.com整理提供,需要 论文可以联系客服人员哦。                                          摘
摘要:2010年以来,中国大陆爆发了一种由未知病原引起的以雏鸭生长迟缓和死亡、蛋鸭产蛋下降为特点的传染性疫病。该病首先发现于江浙沪地区,之后迅速蔓延至中国东南部各省市,其中包括山东、北京、河北、福建、安徽、广东和广西等。即便在冬季,该疫病的传播依然相当的迅速,这给全国的养鸭业带来了巨大的威胁。流行病学调查显示对此疫病最易感的为麻鸭,感染率为100%,致死率大约为5%到30%。为了明确该病的病原,我们以奉贤发病鸭场采集发病鸭实质脏器,经0.22um滤器过滤除菌后,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚,进行病毒分离。结果鸡胚在接种后2-6天内死亡,死亡鸡胚可见尿囊膜增厚,胚体出血、水肿,经测定该死亡鸡胚尿囊液的毒价达到10~(5.5)ELD50/mL。为了确定该病毒的分类学地位,病毒经蔗糖密度梯度离心纯化后在电镜下观察,发现该病毒粒子具有囊膜,直径约为45-50nm。提取该病毒核酸,用不同的核酸酶消化后,发现病毒核酸可被RNase消化而不被DNase降解,表明该病毒为RNA病毒。在此基础上我们构建了cDNA文库,随机挑选阳性克隆、测序,结果获得该病毒的两个基因的序列,序列浅析表明该基因序列与坦布苏病毒Mm1775株基因的同源性分别为88.3%和88.0%。病毒交叉中和实验表明该病毒与乙型脑炎病毒无交叉中和活性,但该病毒可被抗坦布苏病毒Mm1775株E蛋白的血清中和。根据国际命名规则,将该病毒命名为鸭坦布苏病毒奉贤2010株(FX2010)。探讨表明,FX2010对乙醚和氯仿敏感,不具有血凝活性。FX2010可在DEF细胞上增殖,随着病毒传代增加CPE更加的显著,同时也可在Vero细胞上增殖,但不产生CPE。FX2010经鼻腔感染和肌肉感染九周龄麻鸭后,可以感染鸭的肾脏、脑、脾脏、肺脏、胰脏、气管、血液等组织脏器中分离到较高滴度的病毒,而肝脏中的病毒含量较低;对病理学观察发现感染鸭出现中度脑炎、严重肾炎、脾脏组织细胞坏死,免疫组织化学实验显示在多个组织内皆有病毒抗原有着。为了了解该病毒分子遗传信息,我们通过引物步移法获得覆盖FX2010病毒株cDNA全长的若干克隆,然后经3’和5’RACE获得该病毒3’和5’末端序列,序列拼接后显示该病毒全长含有10991个核苷酸,编码十个蛋白。利用生物信息学手段对FX2010株进行全基因组序列的浅析。系统进化浅析显示,该毒株与BYDV处于同一分支上,同属于坦布苏病毒。进一步预测该病毒的不同蛋白之间的剪切位点和N连接糖基化位点,结果可见该病毒不同蛋白之间剪切位点与同种属的其他病毒具有一定的保守性。 关键词:鸭坦布苏病毒奉贤2010(FX2010)株论文 分离论文 鉴定论文 生物学特性论文
本论文由http://www.qqg88.com整理提供,需要 论文可以联系客服人员哦。

    摘要6-7

    Abstract7-14

    第一章 引言14-21

    1.1 鸭坦布苏病毒概述14

    1.2 DTMUV 的分子生物学14-17

    1.2.1 DTMUV 的形态结构14-16

    1.2.2 DTMUV 在细胞内的复制16

    1.2.3 鸭坦布苏病毒的培养特性16-17

    1.3 DTMUV 的流行病学17

    1.4 DTMUV 的诊断与防控17-19

    1.4.1 临床诊断17-18

    1.4.2 实验室诊断18-19

    1.5 鸭坦布苏病毒的防控19-20

    1.6 探讨的目的及作用20-21

    第二章 鸭坦布苏病毒的分离与鉴定21-32

    2.1 材料21-22

    2.1.1 标本21

    2.1.2 细胞系与试验动物21

    2.1.3 主要溶液及培养基的配制21-22

    2.1.4 主要仪器设备和器材22

    2.2 策略22-28

    2.2.1 标本的采集及处理22-23

    2.2.2 病原体的 SPF 鸡胚分离培养23

    2.2.3 病毒的纯化23

    2.2.4 病毒的鉴定及其理化性质的测定23-24

    2.2.5 cDNA 文库的建立24-28

    2.3 实验结果28-31

    2.3.1 病毒分离结果28-29

    2.3.2 病毒纯化结果29

    2.3.3 电镜观察结果29

    2.3.4 病毒鉴定结果29-31

    2.4 讨论31-32

    第三章 鸭坦布苏病毒生物学特性的探讨32-43

    3.1 材料32

    3.1.1 病毒、细胞、实验动物32

    3.1.2 主要溶液及细胞培养基的配制32

    3.2 策略32-36

    3.2.1 细胞培养特性32-33

    3.2.2 血凝试验33

    3.2.3 病毒交叉中和试验33-34

    3.2.4. 病毒毒力测定34-35

培养特性32-333.2.2 血凝试验333.2.3 病毒交叉中和试验33-343.2.4. 病毒毒力测定34-351 2 下一页

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