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浅论基因猪α干扰素和白细胞介素-2在真核细胞中表达及其表达产物活性********
L-2的含量为97.45pg/mL,而未转染对照组含量为75.36 pg/mL转染组高于对照组1.29倍;经SPSS统计软件浅析表明整合外源基因的真核细胞上清液淋巴细胞增殖作用与阴性对照组相比均差别显著,表明这两个基因的表达产物有很好的活性,可以用来抗病毒。(4)成功克隆了猪Mxl基因启动子和Mxl基因并将这两个基因亚克隆到PGKneotpALox2真核表
摘要:目的:α干扰素(interferon-a)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫激活功能的细胞因子,白细胞介素2在抗肿瘤、免疫调节及感染性疾病的治疗中也具有重要作用,同时它还能激活B淋巴细胞,参与机体的体液免疫应答,推动抗体分泌,增强体液免疫应答。Mx蛋白是Ⅰ型和Ⅲ型干扰素(IFN)诱导细胞后产生的天然抗病毒蛋白,有很好抗病毒活性,且副作用小。本实验将猪α干扰素基因和白细胞介素2基因分别转染真核细胞,检测这两个基因的表达,及表达产物的抗病毒活性。为将这两个基因用于疫苗佐剂及转基因抗病育种动物奠定了基础。同时也克隆了猪Mxl基因启动子及Mxl基因,并构建了真核表达载体,为进一步探讨猪Mxl基因奠定了基础。策略:(1)根据已发表的猪IFN-a和猪IL-2基因的核酸序列设计引物,克隆出这两个基因,鉴定正确后将两个基因分别连到pcDNA3.1载体上构建真核表达载体,分别命名为pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL;(2)用构建好的真核表达载体分别转染真核细胞通过G418筛选出转染外源基因的细胞,并用RT-PCR进一步检测是否整合外源基因;(3)采取实时定量PCR检测猪IFN-α和IL-2基因在真核细胞内mRNA表达水平、采取ELISA策略检测猪IFN-α和IL-2基因在真核细胞内蛋白表达水平、采取淋巴细胞增殖实验测猪IFN-α和IL-2基因在真核细胞内表达蛋白的生物学活性。(4)根据Genbank已公布的猪Mxl基因启动子、Mxl基因的核苷酸序列,设计合成两对特异引物分别扩增了猪Mxl基因启动子和Mxl基因,并将这两个基因亚克隆到含有G418筛选标记的PGKneotpALox2真核表达载体上结果:(1)成功克隆了猪IFN-α和猪IL-2基因,经测序鉴定正确,并将其分别连到pcDNA3.1真核表达载体上构建成功pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL转染质粒。(2)通过G418筛选出稳定表达猪IFN-α和猪IL-2基因的真核细胞,经RT-PCR鉴定为阳性。(3)实时定量PCR表明转入猪IFN-α基因的真核细胞其IFN-αmRNA表达量高于阴性未转染组1.52倍,转入猪IL-2基因的真核细胞其IL-2 mRNA表达量高于阴性未转染组1.43倍;对整合外源基因真核细胞上清液ELISA检测结果显示,猪IFN-α的含量为121.45pg/mL,而未转染该基因的对照组含量为89.36pg/mL转染组高于对照组1.35倍。猪IL-2的含量为97.45pg/mL,而未转染对照组含量为75.36 pg/mL转染组高于对照组1.29倍;经SPSS统计软件浅析表明整合外源基因的真核细胞上清液淋巴细胞增殖作用与阴性对照组相比均差别显著,表明这两个基因的表达产物有很好的活性,可以用来抗病毒。(4)成功克隆了猪Mxl基因启动子和Mxl基因并将这两个基因亚克隆到PGKneotpALox2真核表达载体上。结论:猪IFN-a和猪1L-2基因可以在真核细胞中很好表达,且表达产物具有很好的活性,为开发新型基因工程疫苗佐剂和转基因抗病动物奠定了基础。同时本实验也构建了猪Mxl真核表达载体,为进一步探讨Mxl基因提供了实验基础。 关键词:猪干扰素α论文 猪白细胞介素2论文 真核表达论文 时实定量PCR论文 猪Mxl论文
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    怎样写提纲

    摘要6-8

    Abstract8-12

    英文缩略表12-13

    引言13-15

    第一章 文献综述 猪A干扰素与白细胞介素2探讨进展15-22

    1 A干扰素探讨进展15-19

    1.1 α干扰素介绍15

    1.2 α干扰素结构特点及分子生物学特性15-16

    1.3 α干扰素产生机理16

    1.4 α-干扰素的信号转导路径16-17

    1.5 α-干扰素的作用机理17

    1.6 α-干扰素的生物学活性17-18

    1.7 α-干扰素基因工程探讨18

    1.8 α-干扰素的运用及前景展望18-19

    1.9 INF-α探讨在预防兽医学中的作用19

    论文格式模板

    2 白细胞介素2探讨进展19-22

    2.1 白细胞介素2介绍19-20

    2.2 白细胞介素2核酸及蛋白结构特点20

    2.3 IL-2的运用20-22

    第二章 实验探讨22-70

    实验一 猪IFN-A、IL-2基因的克隆及序列浅析22-33

    1 材料和策略22-28

    1.1 实验材料22-23

    1.2 PoIFN-α、PoIL-2 基因引物设计23

    1.3 猪外周血淋巴细胞

22-331 材料和策略22-281.1 实验材料22-231.2 PoIFN-α、PoIL-2 基因引物设计231.3 猪外周血淋巴细胞1 2 下一页

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