1.4 淋巴细胞总RNA提取及反转采23-24

1.5 PoIFN-α、PoIL-2基因的扩增24-25

1.6 目的基因的回收与连接25-26

1.7 连接产物分别转化大肠杆菌DH5α感受态细胞26

1.8 pMD18-IFN、pMD18-IL重组质粒的鉴定26-28

1.9 PoIFN-α基因和PoIL-2基因的序列测定及浅析28

2 结果28-31

2.1 PoIFN-α基因和PoIL-2基因的RT-PCR扩增结果28-29

2.2 PoIFN-α基因和PoIL-2基因重组质粒菌液PCR鉴定29-30

2.3 PoIFN-α基因和PoIL-2基因重组质粒双酶切鉴定30-31

2.4 PoIFN-α基因和PoIL-2基因核苷酸序列的浅析31

3 讨论31-33

实验二 PoIFN-A和PoIL-2基因转染真核细胞及筛选33-42

1 材料和策略33-38

1.1 实验材料33

1.2 PoIFN-α和PoIL-2基因真核表达载体的构建33-34

1.3 PoIFN-α和PoIL-2基因真核表达载体的鉴定34-35

1.4 PoIFN-α和PoIL-2基因重组质粒转染真核细胞35-38

2 结果38-41

2.1 pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL真核表达载体的PCR鉴定结果38-39

2.2 pcDNA3.1-IFN、pcDNA3.1-IL真核表达载体的酶切鉴定结果39

2.3 转入外源基因的真核细胞G418筛选结果39-40

2.4 整合外源基因的真核细胞RT-PCR鉴定结果40-41

3 讨论41-42

实验三 PoIFN-A和PoIL-2基因在真核细胞内表达,及表达产物活性浅析42-57

1 材料和策略43-48

1.1 实验材料43

1.2 PoIFN-α和PoIL-2基引mRNA表达Real-time检测43-47

1.3 PoIFN-α和PoIL-2基因表达蛋白表达的ELISA检测47

1.4 重组PoIFN-α和PoIL-2产物的淋巴细胞增殖实验47-48

2 结果48-55

2.1 实时荧光定量标准载体目的片段克隆结果48-49

2.2 实时荧光定量标准载体目的片段测序结果49-50

2.3 PoIFN-α基因、PoIL-2基因和β-actin基因的标准曲线结果50-52

2.4 PoIFN-α、PoIL-2基因在真核细胞中表达的CT值浅析结果52-53

2.5 外源基因表达的ELISA检测结果53-55

2.6 外源基因表达产物的促淋巴细胞增殖实验结果55

3 讨论55-57

实验四 猪Mx1基因启动子及Mx1基因扩增57-70

1 材料和策略57-62

1.1 实验材料57

1.2 Mx1启动子、Mx1基因引物设计57-58

1.3 猪外周血淋巴细胞分离与培养58

1.4 淋巴细胞总RNA提取及反转录58

1.5 猪Mx1启动子、Mx1基因的RT-PCR扩增58-59

1.6 目的基因的回收与连接59-60

1.7 连接产物分别转化感受态细胞及蓝白斑筛选60

1.8 Mx1启动子载体和Mx1载体的鉴定60-61

1.9 Mx1启动子和Mx1基因真核表达载体的构建及鉴定61-62

2 结果62-69

2.1 Mx1启动子基因和Mx1基因的RT-PCR扩增结果62-63

2.2 PGK-MP和PMD18-Mx1载体重组质粒的鉴定63-66

2.3 PGK-Mx1P-Mx1真核表达载的鉴定66-68

2.4 PGK-Mx1P-Mx1构建后图谱及PGKneotpALox2载体图谱68-69

3 讨论69-70

结论70

革新点70-71

参考文献71-77

致谢77-78

作者介绍78-79

导师评阅表79