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简谈基因RINGfinger类基因功能及抗穗发芽转基因小麦的创制****本科毕业论文

摘要:利用RT-PCR并结合RACE扩增,克隆获得了两个RING finger类转录因子基因,RsRHA2b、TaRHA2b,并对上面陈述的基因的结构特点、表达特性进行了探讨。在此基础上,采取农杆菌介导法分别将35S启动子、种子特异启动子A(含信号肽序列)和种子特异启动子B(不含信号肽序列)驱动的RsRHA2b基因导入粳稻品种kitaake,获得经分子鉴定证实的转基因水稻植株,以及采取基因枪轰击法获得的多种载体类型转RsRHA2b基因小麦,并对RsRHA2b基因的功能及转基因抗穗发芽特性进行了探讨,主要探讨结果如下:1、TaRHA2b、RsRHA2b克隆及结构、表达浅析采取RT-PCR及RACE扩增,分别以小麦和萝卜中克隆获得一个RING finger类转录因子基因,RsRHA2b、TaRHA2b;序列浅析显示,TaRHA2b全长845 bp,包含一个长度为465 bp,编码155个氨基酸残基的开放阅读框,分子量约为16.94 kD,等电点为7.77,属于碱性蛋白;RsRHA2b全长697 bp,ORF长度为459 bp,编码152个氨基酸,分子量约为16.44 kD,等电点为7.65,属于碱性蛋白。转录表达谱浅析显示,RsRHA2b在萝卜花药和茎中表达量显著高于叶、叶柄和稍;TaRHA2b基因在小麦穗轴、外稃和胚乳组织中的表达量最高,信号强度显著高于根、茎和叶组织,表明RsRHA2b基因和小麦TaRHA2b基因一样,转录表达都具有很强的组织特性。2、组成型及融合型双价启动子驱动RsRHA2b转化载体构建及转基因水稻的获得分别构建了组成型启动子35S启动子、35S::GluCP1和35S::GluCP2驱动RsRHA2b基因表达的转化载体,在此基础上,以农杆菌介导将上面陈述的表达形式的RsRHA2b基因,以及空载体导入水稻中并分别获得了26株、28株、22株、20株再生苗,特异性PCR鉴定证实外源目的基因已整合进入受体植株基因组,转基因阳性检测率平均达到100%;RT-PCR浅析结果显示,在转基因植株的根、茎、叶和胚乳中均能检测到目的基因RsRHA2b的转录本,其中叶和胚乳中的表达量均显著高于根和茎中的表达量,而双价启动子驱动的转基因株系的表达水平高于单价启动子类型。表明整合进入受体基因组的目的基因能够正确表达。3、转RsRHA2b基因水稻种子萌发特性浅析转RsRHA2b基因水稻种子萌发实验显示,转基因水稻种子的萌发速率显著比非转基因水稻种子萌发慢,无论是否添加ABA及受到盐胁迫和干旱胁迫。这表明外源基因RsRHA2b的导入可以有效延缓转基因水稻种子的萌发速率,是改良作物抗穗发芽能力的优异基因资源。4、转RsRHA2b基因抗穗发芽小麦的创制以豫麦18未成熟幼胚为受体,采取基因枪轰击法将三种形式的RsRHA2b基因导入该受体,获得经PCR及酶切鉴定证实的转基因小麦株系8株,上面陈述的材料正在人工气候室加代繁殖,以加速进程进一步验证RsRHA2b基因在小麦中的功能。 关键词:RHA2b论文 基因克隆论文 表达浅析论文 转基因水稻论文 抗穗发芽转基因小麦论文
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    致谢4-8

    摘要8-9

    1 文献综述9-20

    1.1 小麦抗穗发芽探讨进展9

    1.1.1 小麦穗发芽现象及危害9

    论文格式范文

    1.2 影响小麦穗发芽的因素9-12

    1.2.1 环境条件对穗发芽的影响9-10

    怎样写摘要

    1.2.2 a-淀粉酶对穗发芽的影响10-11

    1.2.3 种子休眠性对穗发芽的影响11

    1.2.4 内源激素对穗发芽的影响11-12

    1.3 小麦抗穗发芽遗传特性的探讨12

    1.4 小麦穗发芽抗性的分子生物学探讨12-14

    怎样写开题报告

    1.5 ABA 的生物合成14-15

    1.6 ABA 信号转导15-16

    1.7 泛素介导的蛋白降解途径16-20

    1.7.1 RING 指蛋白17

    1.7.2 RING 指蛋白的功能17-20

    2 材料与策略20-34

    2.1 实验材料20

    2.1.1 供试材料20

    2.1.2 主要分子生物学试剂20

    2.2 总 RNA 的提取及纯化20-23

    2.2.1 萝卜幼苗和小麦叶片总 RNA 的提取20-22

    2.2.1.1 RNA 的质量及纯度检测21

    2.2.1.2 分光光度计 RNA 纯度检测21

    2.2.1.3 cDNA 第一条链的合成21-22

    2.2.2 小麦胚及胚乳总 RNA 的提取22-23

    2.2.2.1

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