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探究菜青虫菜青虫酚氧化酶原编码基因的分子克隆及其表达毕业生论文
酸序列与其它鳞翅目昆虫PPO2基因具有较高的同源性(70.0%~72.0%)。4. PrPPO1和PrPPO2各均具有两个高度保守的铜离子结合位点,及位于铜离子结合位点内的6个保守的组氨酸残基,此外,PrPPO1还包含一个类似于脊椎动物的α-巨球蛋白的硫羟酸酯区域。PrPPO1与PrPPO2的N端均不含信号肽,不有着跨膜结构域。5. PrPPO1中,α-螺旋占17.16%
摘要:酚氧化酶(phenoloxidase,EC.1.14.18.1,简称PO)是一种重要的酶类,广泛有着于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内,在昆虫变态发育和免疫系统中起着重要作用,主要功能可总结为:(1)参与表皮的硬化和黑化;(2)对卵壳的鞣化作用;(3)参与伤害防御;(4)加速伤口的愈合等,是一种潜在的靶标酶。本论文通过RT-PCR和RACE技术,克隆得到了编码菜青虫(Pieris rapae)酚氧化酶原的两个基因Prophenoloxidase-1(PrPPO1)和Prophenoloxidase-2(PrPPO2),并对序列信息进行了浅析;并通过Semi-Quantitative RT-PCR和QuantitativeReal-time PCR探讨了PPO1和PPO2在菜青虫不同发育时期的表达情况;并用白僵菌制剂注射菜青虫5龄幼虫,探讨白僵菌分生孢子对菜青虫PPO转录活性的影响,同时利用两种典型的PO抑制剂——槲皮素和曲酸,对菜青虫5龄幼虫进行了处理,测定了处理后4h、8h和12h时PPO1的表达情况。探讨结果如下:1. PrPPO1全长cDNA序列有3338bp,包含一个2049bp的开放阅读框(ORF),一个63bp的5’非编码区(5’UTR)和一个1226bp的带有加尾信号的3’非编码区(3’UTR)。开放阅读框以第64个核苷酸开始,终止于第2102个核苷酸,由其推导的氨基酸序列以甲硫氨酸为起始氨基酸,长为682个氨基酸,分子量为78.57kDa,估测等电点pI为6.37。2. PrPPO2部分cDNA序列有1679bp,包含一个1173bp的开放阅读框(ORF)和一个506bp的带有加尾信号的3’非编码区(3’UTR)。开放阅读框以第1个核苷酸开始,终止于第1173个核苷酸,由于该片段为部分cDNA,其他相关参数不做预测。3. PrPPO1基因的氨基酸序列与其它鳞翅目昆虫PPOl基因具有较高的同源性(69.73%~73.15%);PrPPO2基因的氨基酸序列与其它鳞翅目昆虫PPO2基因具有较高的同源性(70.0%~72.0%)。4. PrPPO1和PrPPO2各均具有两个高度保守的铜离子结合位点,及位于铜离子结合位点内的6个保守的组氨酸残基,此外,PrPPO1还包含一个类似于脊椎动物的α-巨球蛋白的硫羟酸酯区域。PrPPO1与PrPPO2的N端均不含信号肽,不有着跨膜结构域。5. PrPPO1中,α-螺旋占17.16%,随机卷曲63.20%,它们是PrPPO1最大量的结构元件,延伸链占19.65%,散布在整个蛋白质中,无β转角有着,同源建模显示PrPPO1 结构均为“α/β型”中的“滚筒结构”。6. PrPPO1在成虫中的表达量设定为1.0,PrPPO1在卵和4龄幼虫中表达量最高,表达量分别为2.76和5.60;PrPPO1在5龄幼虫和蛹中表达量较低,为0.21和0.26;在1龄、2龄、3龄幼虫中,PrPPO1的表达量比较接近,分别为2.16、1.82和1.52。PrPPO2在成虫中的表达量设定为1.0,PrPPO2在4龄幼虫中表达量最高,表达量为13.24;卵和3龄幼虫次之;PrPPO2在5龄幼虫中表达量较低,为0.96;在1龄和2龄幼虫中,PrPPO1的表达量比较接近,分别为2.98和2.65;预蛹和蛹比较接近,分别为1.91和1.42。通过Real-time PCR和RT-PCR比较PrPPO表达量变化结果非常相近。7.白僵菌接种试验中,侵染组和对照组(PBS)在6h-12h之间PrPPO1的表达量均有大幅度的升高,在12h的表达量分别为6h的5.67倍和5.0倍。而在12h后直至24h,PrPPO1的表达水平开始回落,且在整个实验历程中侵染组和对照组(PBS)PrPPO1的表达水平差距不显著,说明白僵菌侵染菜青虫对PPO影响甚微。8.在不同浓度的槲皮素和曲酸注射菜青虫的条件下,PrPPO1的转录活性抑制不显著。 关键词:菜青虫论文 酚氧化酶论文 昆虫免疫论文 荧光定量PCR论文 人工接种论文
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    摘要9-12

    Abstract12-16

    1 引言16-42

    1.1 文献综述16-38

    1.1.1 酚氧化酶的起源17-19

    1.1.2 酚氧化酶的分布与定位19-22

    1.1.3 酚氧化酶的免疫功能22-2

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