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探讨血清六神丸抗肺癌血管生成及信号转导途径的实验及临床学年论文范文

摘要:目的:通过体外实验观察六神丸含药血清对人肺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞形态、生长状态、VEGF和VEGFmRNA、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表达的影响,K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表达与VEGF表达的相关性,临床观察六神丸联合化疗治疗未经任何治疗ⅢB-IV期或不能手术ⅢA期肺癌患者的临床疗效和血清CEA、CYFRA21-1、VEGF的变化,探讨六神丸抗血管生成是否通过激活Ras→Raf→MEK→MAPK信号转导途径及血清VEGF是否可作为临床观察疗效指标之一。策略:1.实验探讨采取体外培养人肺癌A549细胞,以不同浓度六神丸含药血清与A549共同孵育并分组观察,MTT法检测六神丸含药血清对人肺癌细胞系A549的增殖、光学显微镜下观察细胞形态、倒置相差显微镜下观察生长状态、流式细胞仪检测六神丸含药血清对细胞凋亡的影响、免疫细胞化学法测定VEGF、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表达情况,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测VEGFmRNA的影响。2.临床探讨观察六神丸联合化疗及化疗组对非小细胞肺癌患者的临床疗效及血清CEA、CYFRA21-1、VEGF表达水平的影响。全部病例均来自山东中医药大学附属医院,2009年12月至2011年12月肿瘤内科住院病人。制定病例纳入标准,纳入探讨病人60例,随机分为观察组30例,对照组30例,对照组采取TP化疗案例,观察组在化疗的同时及化疗期间,同时给予六神丸。收集所有患者治疗前及治疗两周期后外周血5ml,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测VEGF水平,放射免疫浅析法检测CYFRA21-1、CEA表达水平,观察治疗前后的临床疗效。结果:1.实验探讨(1)六神丸含药血清对体外培养A549细胞具有显著细胞毒作用,且随着含药血清浓度的增加OD值逐渐降低,有显著性差别。(2)各含药血清组均可破坏人肺癌A549细胞的正常形态,阻碍其增殖生长;六神丸含药血清对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用与含药血清的浓度呈正相关;六神丸与DDP联合用药有协同作用。(3)各含药鼠血清组、DDP单药组以及DDP+10%含药鼠血清组的早期凋亡率显著高于对照组;随着含药浓度的不断升高,早期凋亡率也显著增加;联合组的早期凋亡率显著高于各含药鼠血清组和DDP单药组。(4)各含药鼠血清组、DDP单药组以及DDP+10%含药鼠血清组的VEGF、ERK1、ERK2、p-ERK、K-RAS表达量及VEGFmRNA相对表达量均显著低于10%胎牛血清组,有显著性差别;与药物浓度呈负比。(5)统计结果显示六神丸含药血清对A549细胞降低VEGF的表达与其对ERK-1、ERK-2、p-ERK、K-ras表达的影响呈显著正相关(r=0.887,0.835,0.952,0.866)。2.临床探讨(1)两组化疗完成情况:观察组2周期化疗完成率93.3%(28/30),高于对照组86.7%(26/30);(2)近期客观疗效:经χ2检验,两组有效率和病灶稳定率比较均无显著性差别;(3)两组治疗前后血清VEGF、CEA、CYFRA21-1水平的比较:两组治疗后VEGF、CEA、CYFRA21-1表达水平均较治疗前显著下降;与对照组相比,观察组VEGF、CEA表达水平更低,幅度下降更大,具有显著统计学差别。与对照组相比,观察组CYFRA21-1表达水平更低,但两组比较无统计学差别。(4)两组患者血清CEA、CYFRA21-1水平与VEGF水平行相关性浅析:结果呈显著正相关(r=0.399、0.275,P0.01)。结论:六神丸通过抑制Ras→Raf→MEK→MAPK信号转导途径降低肺癌A549细胞VEGF蛋白的表达以而发挥抗血管生成的作用,具有抑制肺癌A549细胞生长、推动凋亡的作用,可降低肺癌患者血清VEGF的水平,同时六神丸联合化疗效果更好,二者具有协同作用。临床联合检测肺癌患者血清VEGF、CEA、CYFRA21-1的变化具有观察疗效及监测病情的作用。 关键词:肺癌论文 六神丸论文 抗血管生成论文 信号转导途径论文 VEGF论文 ERK论文 K-RAS论文
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    提要3-5

    Abstract5-10

    引言10-12

    实验探讨12-30

    1 一般材料与含药血清的制备12-15

    1.1 实验材料12-15

    1.2 含药血清的制备15

    2 细胞培养15-16

    2.1 细胞培养策略15-16

    2.2 细胞悬液的制备16

    3 统计学策略16

    实验一 MTT 法检测六神丸含药血清对人肺癌 A549 细胞的细胞毒作用16-19

    实验二 六神丸含药血清对人肺癌 A549 细胞的形态学及生长状态的影响19-21

    实验三 流式细胞仪检测六神丸含药血清对人肺癌 A549 细胞凋亡的影响21-23

    实验四 六神丸含药血清对人非小细胞肺癌 A549 VEGF 及 VEGFmRNA 的影响23-27

    实验五 免疫组化法检测六神丸含药血清对人肺癌 A549 细胞 ERK1、ERK2、p-ERK、K-RAS 蛋白表达的影响27-29

    实验六 六神丸含药血清降低A549细胞VEGF表达与ERK-1、ERK-2、p-ERK、K-RAS 表达的相关性探讨29-30

    临床探讨30-35

    1 临床资料30-31

    1.1 病例来源30

    1.2 非小细胞肺癌的分期30

    1.3 病例选择标准30-31

    2 一般临床资料31

    3 治疗策略31-32

    4 观察指标和策略32

    4.1 治疗前后肿瘤病灶变化32

    4.2 治疗前后肿瘤标志物 CEA、CYFRA21-1 的变化32

    4.3 治疗前后血清 VEGF 表达水平的变化32

    4.4 实体瘤客观疗效评定标准32

    5 注意事项32

    6 统计学策略32

    7 结果32-35

    7.1 两组化疗完成情况32

    7.2 近期客观疗效32-33

    7.3 两组治疗前后血清 VEGF、CEA、CYFRA21-1 水平的比较33-34

    7.4 两组患者血清 CEA、CYFRA21-1 水平与 VEGF 行相关性浅析34-35

    讨论35-48

    1 VEGF 与恶性肿瘤血管的生成及肺癌的相关性36-37

    2 K-RAS 与肺癌37-38

    3 Ras→Raf→MEK→MAPK 信号转导途径与恶性肿瘤38-40

    4 六神丸的方药浅析40-42

    5 六神丸治疗实体瘤的探讨进展42-43

    6 六神丸抗肿瘤的药理探讨43-44

    7 结果浅析44-48

    7.1 实验探讨44-46

    7.2 临床探讨46-48

    结语48-49

    参考文献49-57

    综述57-68

    参考文献62-68

    附录68-77

    致谢77-78

    查新报告78-87

    在读期间发表的论文87-99

    临床工作总结99-106

    详细摘要106-113

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