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浅论细胞增强UV-B辐射与He-Ne激光辐照对小麦细胞凋亡影响的论文的基本格式
定45-463 结果与浅析46-523.1 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激1 2 下一页
摘要:近年来,植物细胞凋亡的诱导途径和信号调控机理已经成为人们探讨的热点不足。本探讨以小麦(临优2018)为材料,采取10.08 kJ·m~(-2)·d~(-1)UV-B辐射与5mW·mm~(-2)He-Ne激光辐照及二者组合对其幼苗进行处理,筛选出了适合流式细胞仪浅析的小麦幼苗根细胞核提取的策略,并对各处理组小麦幼苗根在不同处理天数下细胞凋亡的变化,以及相关信号通路和抗氧化系统的变化情况进行探讨。结果显示:(1)在直接剪切法所用的三种细胞核提取缓冲液中,MgSO_4缓冲液的提取效果最好,细胞核形态及内部结构完整,且得到的细胞核量多;OttoⅠ对细胞核的提取效果显著,但是在加入OttoⅡ后细胞核破裂显著;Tris·MgCl_2缓冲液提取的细胞核数量较少;酶解法制备的细胞核悬浮液中杂质较多,且需时较长。结果表明采取MgSO_4提取缓冲液的直接剪切法适合于流式细胞仪对小麦幼苗DNA含量的浅析。(2)增强UV-B辐射能诱导小麦幼苗根尖细胞出现细胞核向中心聚集,并形成凋亡小体等细胞凋亡现象。用流式细胞仪对不同处理组细胞凋亡情况进行定量浅析,结果同样证明了增强UV-B处理能增加凋亡的细胞数目,并且在处理第5d时变化最为显著。而经UV-B辐射和He-Ne激光复合处理后,细胞凋亡数目比单独UV-B处理组显著减少,差别极显著。由此认为He-Ne激光在一定程度上缓解了增强UV-B辐射对小麦幼苗根细胞的凋亡。(3)增强UV-B辐射使小麦幼苗根O_2和H_2O_2等活性氧积累,而且线粒体膜通透性会随着增强UV-B辐射处理天数增加而增大,同时造成线粒体细胞色素c的释放,诱导细胞凋亡的产生。He-Ne激光则能够在一定程度上减少活性氧的形成并且使细胞色素c释放量减少,有一定的修复作用。(4)增强UV-B辐射会造成小麦幼苗根抗氧化酶(POD、CAT、SOD)活性和非酶类抗氧化物(GSH、AsA)含量下降,还会造成POD、CAT和SOD同工酶的表达抑制,酶带有不同程度的减弱或消失,而He-Ne激光则对此损伤有部分的修复作用,提升抗氧化系统的活力,推动各抗氧化酶同工酶的基因表达,减少UV-B辐射的损伤。 关键词:He-Ne激光论文 UV-B论文 小麦论文 细胞凋亡论文 细胞色素C论文 抗氧化论文
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    摘要3-5

    Abstract5-14

    前言14-15

    1 增强 UV-B 辐射对植物的影响15-19

    1.1 增强 UV-B 辐射对植物生长发育的影响15

    1.2 增强 UV-B 辐射对植物体内生物大分子的影响15-17

    1.2.1 增强 UV-B 辐射对植物 DNA 的影响15-16

    1.2.2 增强 UV-B 辐射对植物氨基酸和蛋白质的影响16-17

    1.3 增强 UV-B 辐射对植物生理代谢的影响17-19

    1.3.1 增强 UV-B 辐射对植物光合作用的影响17-18

    1.3.2 增强 UV-B 辐射对紫外吸收物质合成的影响18-19

    1.3.3 增强 UV-B 辐射对植物抗氧化系统的影响19

    2 激光对植物的生物学效应19-22

    2.1 激光及激光器的种类20

    2.2 激光生物学效应机制20-21

    2.2.1 激光生物热效应21

    2.2.2 激光光化效应21

    2.2.3 激光机械效应21

    2.2.4 激光电磁效应21

    2.3 激光对植物的影响21-22

    2.3.1 激光对植物生长发育的影响21-22

    2.3.2 激光对植物生理、生化代谢的影响22

    2.3.3 激光对植物抗逆性的影响22

    3 植物细胞凋亡的探讨进展22-27

    3.1 动植物细胞凋亡的区别22-23

    3.2 植物细胞凋亡在植物生长发育中的作用23

    3.3 植物细胞凋亡与生物或非生物胁迫23

    3.4 植物细胞凋亡相关的蛋白酶调控23-24

    3.5 植物细胞凋亡相关的信号分子24-25

    3.6 植物细胞凋亡的相关细胞器25-27

    3.6.1 线粒体和细胞色素 c 与植物细胞凋亡25-27

    3.6.2 叶绿体与植物细胞凋亡27

    3.6.3 其它细胞器与植物细胞凋亡27

    4 本探讨的主要目的及主要内容27-28

    第一章 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激光辐照对小麦细胞凋亡的影响28-38

    1 材料培养与处理28-29

    1.1 材料培养28

    1.2 处理设置28-29

    1.2.1 UV-B 辐射处理28

    1.2.2 He-Ne 激光辐射处理28-29

    2 策略29-30

    2.1 适合流式细胞仪浅析的小麦细胞核提取策略29-30

    2.1.1 不同细胞核提取缓冲液29

    2.1.2 策略29-30

    2.2 不同处理组小麦幼苗根细胞凋亡检测30

    2.2.1 细胞凋亡形态观察30

    2.2.2 流式细胞仪浅析30

    3 结果与浅析30-36

    3.1 适合流式细胞仪浅析的小麦细胞核提取策略30-33

    3.1.1 小麦幼苗细胞核提取策略比较30-32

    3.1.2 小麦幼苗细胞核的流式细胞仪浅析32-33

    3.2 不同处理组小麦细胞凋亡检测33-36

    3.2.1 增强 UV-B 辐射对小麦幼苗根细胞凋亡的诱导33-34

    3.2.2 He-Ne 激光和增强 UV-B 辐射对小麦幼苗根细胞凋亡的流式细胞仪浅析34-36

    4 讨论36-38

    4.1 适合流式细胞仪浅析的小麦细胞核提取策略36-37

    4.2 不同处理组小麦细胞凋亡检测37-38

    第二章 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激光辐照对小麦细胞凋亡相关信号通路物质分子的影响38-44

    1 材料培养与处理38

    2 策略38-39

    2.1 O_2产生速率测定38-39

    2.1.1 标准曲线的制备38

    2.1.2 O_2含量测定38-39

    2.2 H_2O_2含量测定39

    2.3 线粒体指标测定39

    2.3.1 线粒体的提取与分离39

    2.3.2 线粒体膜通透性检测39

    2.3.3 线粒体细胞色素 c/a 测定39

    3 结果与浅析39-42

    3.1 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激光辐照对小麦活性氧代谢的影响39-41

    3.1.1 不同处理对小麦幼苗根 O_2含量的影响39-40

    3.1.2 不同处理对小麦幼苗根 H_2O2含量的影响40-41

    3.2 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激光辐照对小麦细胞色素 c 代谢的影响41-42

    3.2.1 不同处理组对小麦幼苗根线粒体膜通透性的影响41-42

    3.2.2 不同处理组对小麦幼苗根线粒体细胞色素 c 含量的影响42

    4 讨论42-44

    第三章 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激光辐照对小麦抗氧化系统的影响44-54

    1 材料培养与处理44

    2 策略44-46

    2.1 抗氧化酶类 POD、CAT、SOD 活性及同工酶测定44-45

    2.1.1 过氧化物酶(POD)活性测定44

    2.1.2 过氧化氢酶(CAT)活性测定44

    2.1.3 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定44-45

    2.1.4 POD、CAT、SOD 同工酶电泳及染色45

    2.2 抗氧化物 GSH 和 AsA 含量测定45-46

    2.2.1 GSH 含量测定45

    2.2.2 ASA 含量的测定45-46

    3 结果与浅析46-52

    3.1 增强 UV-B 辐射与 He-Ne 激

小麦(临优2018)为材料,采取10.08 kJ·m~(-2)·d~(-1)UV-B辐射与5mW·mm~(-2)He-Ne激光辐照及二者组合对其幼苗进行处理,筛选出了适合流式细胞仪浅析的小麦幼苗根细胞核提取的策略,并对各处理组小麦幼苗根在不同处理天数下细胞凋亡的变化,以及相关信号通路和抗氧化系统的变化情况进行探讨。结果显示:(1)在直接剪切法所用的三种细

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