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浅谈家蝇家蝇幼虫凝集素对肝癌的抗肿瘤活性论文的基本格式
白,具有凝集细胞,沉淀多糖的能力。凝集素,广泛地有着于许多物种及高等生物的各个组织中,一部分的凝集素具有一定的抗肿瘤活性。以半乳糖为配基的Sepharose4B经过活化,进行亲和层析,以家蝇幼虫体内得到一种凝集素。其分子量为59kDa,并且具有显著的凝血活性。通过细胞试验证明,家蝇幼虫凝集素可以显著抑制人类肝癌细胞BEL-7402
摘要:凝集素是一类非免疫原的糖蛋白,具有凝集细胞,沉淀多糖的能力。凝集素,广泛地有着于许多物种及高等生物的各个组织中,一部分的凝集素具有一定的抗肿瘤活性。以半乳糖为配基的Sepharose4B经过活化,进行亲和层析,以家蝇幼虫体内得到一种凝集素。其分子量为59kDa,并且具有显著的凝血活性。通过细胞试验证明,家蝇幼虫凝集素可以显著抑制人类肝癌细胞BEL-7402的生长,抑制率最高可达到80%,呈显著的时间和浓度依赖性,并且在同样浓度下对于正常肝细胞L-02没有体现出抑制作用。HE染色和Hoechst33258荧光染色都能观察到典型的凋亡形态,即染色质浓缩和DNA裂解成片段。这表明,凝集素抑制细胞的增殖可能和诱导细胞发生凋亡有关。流式细胞仪浅析表明,通过凝集素作用可以造成BEL-7402细胞的周期阻滞于在G1期,其凋亡率随时间延长而增加。凝集素能够诱导线粒体产生活性氧(ROS)并积累,造成线粒体膜电位缺失,并且细胞内一氧化氮显著升高。经过Western blotting法测定凋亡相关蛋白表达,发现凝集素诱导细胞中的P53周期蛋白表达量升高,使Bax与Bcl-2蛋白的表达比例升高,并且凝集素导还诱导了细胞色素C以线粒体中释放,进而引起了cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9表达量的升高,这说明家蝇幼虫凝集素抑制肝癌细胞BEL-7402的生长,是通过线粒体途径而诱发细胞的凋亡荷瘤小鼠实验说明,相对于空白对照和阳性对照组,凝集素能诱导H22细胞凋亡以而发挥其抗肿瘤作用,治疗历程后荷瘤小鼠的免疫功能不受损伤,IFN-γ和IL-2因子表达水平提升。流式细胞仪显示腹水肿瘤细胞的周期循环被阻滞于G2/M期,RT-PCR法进一步显示其凋亡可能是由于TNF-α升高和NF-κB的下降引起的。 关键词:家蝇幼虫凝集素论文 BEL-7402细胞论文 细胞凋亡论文 线粒体途径论文 H22小鼠论文
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    摘要5-6

    ABSTRACT6-9

    1 前言9-25

    1.1 肿瘤9-11

    1.1.1 肿瘤及其危害9-10

    1.1.2 肝癌对人类的威胁10

    1.1.3 肿瘤的治疗10-11

    1.2 凋亡11-18

    1.2.1 凋亡探讨历史和概念11-12

    1.2.3 凋亡途径12-14

    1.2.4 凋亡蛋白14-15

    1.2.5 线粒体氧化在凋亡中的作用15-17

    1.2.6 凋亡在肿瘤中的运用17-18

    1.3 家蝇18-20

    1.3.1 家蝇幼虫的营养价值19

    1.3.2 家蝇幼虫的用途与开发19-20

    1.4 凝集素20-24

    1.4.1 凝集素的概念20

    1.4.2 凝集素的分布20-22

    1.4.3 凝集素的功能与运用22-24

    1.5 本课题的探讨作用及探讨内容24-25

    2 材料与策略25-44

    2.1 实验材料25-29

    2.1.1 实验动物与肿瘤细胞株25

    2.1.2 主要药品25-27

    2.1.3 仪器与设备27-29

    2.1.4 液体与实验动物处理29

    2.2 实验策略29-44

    2.2.1 家蝇的饲养29-30

    2.2.2 凝集素的制备30-31

    2.2.3 凝集素纯度和分子量的测定31-32

    2.2.4 家蝇幼虫凝集素凝血活性的探讨32-33

    2.2.5 肿瘤细胞体外增殖抑制33-34

    2.2.6 凝集素抗肿瘤形态学观察34-35

    2.2.7 乳酸脱氢酶LDH释放率35

    2.2.8 细胞内生理变化35-37

    2.2.9 流式细胞术(FCM)浅析细胞周期阻断与凋亡37

    2.2.10 流式细胞术(FCM)浅析线粒体势能变化37-38

    2.2.11 免疫印迹检测蛋白表达变化38-40

    2.2.12 荷瘤小鼠建立分组及给药40

    2.2.13 免疫指数的测定40-41

    2.2.14 乳酸脱氢酶(LDH)测肝肾组织损伤41

    2.2.15 凝集素对于腹水细胞的细胞形态学观察41-42

    2.2.16 半定量RT-PCR法检测小鼠免疫指标42-43

    2.2.17 数据处理43-44

    3 结果与讨论44-65

    3.1 家蝇幼虫凝集素的分离纯化44-45

    3.1.1 凝集素亲和层析44-45

    3.1.2 凝集素的电泳鉴定45

    3.2 凝集素的凝血性质鉴定45-46

    3.3 家蝇幼虫凝集素的体外抗肿瘤活性探讨46-58

    3.3.1 肿瘤细胞活性抑制实验46-47

    3.3.2 细胞形态学观察实验47-48

    3.3.3 流式细胞仪FCM检测细胞周期结果48

    3.3.4 细胞内一氧化氮变化48-50

    3.3.5 线粒体氧化以及势能变化50-53

    3.3.6 乳酸脱氢酶LDH释放率53-54

    3.3.7 免疫印迹浅析检测蛋白变化54-58

    3.4 家蝇幼虫凝集素的体内抗肿瘤活性探讨58-65

    3.4.1 小鼠免疫功能影响58-61

    3.4.2 肝肾损伤情况61

    3.4.3 对小鼠腹水细胞的影响61-65

    4 结论65-66

    5 展望66-67

    6 参考文献67-77

    7 攻读硕士学位期间论文发表情况77-78

    8 致谢78

离纯化44-453.1.1 凝集素亲和层析44-453.1.2 凝集素的电泳鉴定453.2 凝集素的凝血性质鉴定45-463.3 家蝇幼虫凝集素的体外抗肿瘤活性探讨46-583.3.1 肿瘤细胞活性抑制实验46-473.3.2 细胞形态学观察实验47-483.3.3 流式细胞仪FCM检测细胞周期结果483.3.4 细胞内一氧化氮变化48-503.3.5 线粒体氧化以及势能变化50-533.3.6 乳酸

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