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谈谈细胞高糖、高同型半胱氨酸诱导小鼠足细胞凋亡的相关机制论文提纲格式
http://www.qqg88.com整理提供,需要 论文可从关系客服人员哦。                                          主要缩略词5-6中文摘要6-8Abstract8-10前言10-12第一章 材料与办法12-211.1 主要仪器121.2 主要实验试剂12-131.3 常用试剂的配制13-141.4 足细胞的培养及传代(培养办法参考 Mundel 等)14-151.5 分组状况及各环境液的配
摘要:目的:观察高同型半胱氨酸(Hcy)与高糖单独或联合运用对小鼠足细胞凋亡极为PKC活性、podocin mRNA表达的影响,研究高糖、高同型半胱氨酸对足细胞损伤的意义机制。办法:1.将小鼠足细胞孵育于含50U/mLγ-干扰素,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素,10%(体积分数)胎牛血清的1640培养液中,33℃细胞培养箱中培养传代,然后将细胞转入不含γ-干扰素的10%胎牛血清1640培养液,37℃培养箱中诱导分化10~14d,倒置显微镜下观察细胞形态。2.将分化成熟的足细胞于不含胎牛血清的1640培养液中同步培养24h,随机分为①对照组:正常对照组(5mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5mmol/L葡萄糖+20mmol/L甘露醇);②损伤组:高Hcy组(1mmol/L的Hcy)、高糖组(25mmol/L葡萄糖)、混合组(1mmol/L的Hcy+25mmol/L葡萄糖);③PKC抑制剂组:高Hcy+白屈菜红碱(10~(-5)/L)、高糖+白屈菜红碱(10~(-5)/L)、高Hcy+高糖+白屈菜红碱(10~(-5)/L);各组细胞继续孵育24、48、72h,通过倒置显微镜观察细胞生长状态;分别收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法检测各组PKC活性,RT-PCR法检测podocin mRNA表达。结果:1.正常组与高渗组相比,凋亡率、PKC活性及podocin mRNA表达差别均无统计学作用。细胞孵育24h时,各组细胞未见到显著的细胞凋亡,凋亡率差别无统计学作用(P>0.05);48h时,高Hcy、高糖、混合组细胞凋亡率分别为(13.42±1.35)%、(12.98±1.02)%、(20.72±0.36)%,较正常组升高(P 0.05),混合组细胞凋亡更加显著(P 0.01);72h时,上面陈述的3组细胞凋亡较48h更加显著(P 0.05),凋亡率分别为(20.27±1.80)%、(21.49±1.20)%、(27.77±1.81)%;高Hcy组、高糖组和混合组细胞孵育24h时,PKC活性较正常组升高(P 0.05),Podocin mRNA表达相比正常对照组降低(P 0.05),混合组更为显著(P 0.01),随着时间推移,48、72h时,上面陈述的差别更为显著(P 0.05)。2.抑制剂组细胞孵育24h时,各组细胞凋亡率较对应的损伤组,差别无统计学作用(P>0.05),48h时,高Hcy、高糖、混合组细胞凋亡率分别为(10.10±1.57)%、(10.33±1.98)%、(16.99±2.44)%,较对应的损伤组降低,差别有统计学作用(P 0.05),72h仍有上面陈述的差别;24h时,podocin mRNA表达较对应的损伤组增高(P 0.05),72h仍有上面陈述的差别。结论:1.高Hcy和高糖均可诱导小鼠足细胞凋亡,且具有一定的时效性,二者共同意义较单独意义时更强,高Hcy可加重高糖对足细胞的促凋亡意义;2.高Hcy和高糖可下调podocin mRNA的表达,且二者具有叠加效应,意义呈时间依赖性;3.PKC异常激活参与了高Hcy和高糖对足细胞的促凋亡意义及下调podocinmRNA表达的意义。 关键词:肾小球足细胞论文 高Hcy论文 高葡萄糖论文 凋亡论文 podocin论文 PKC论文
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    主要缩略词5-6

    中文摘要6-8

    Abstract8-10

    前言10-12

    第一章 材料与办法12-21

    1.1 主要仪器12

    1.2 主要实验试剂12-13

    1.3 常用试剂的配制13-14

    1.4 足细胞的培养及传代(培养办法参考 Mundel 等[1])14-15

    1.5 分组状况及各环境液的配制15

    1.6 ELISA 法测定各组细胞磷酸化蛋白激酶 C15-16

    1.7 Annexin V-FITC 法检测细胞凋亡16-17

    1.8 逆转录-聚合酶链反应17-20

    1.9 统计学处理20-21

    第二章 结果21-30

    一.光镜下观察细胞形态21

    二.ELISA 法测定 PKC 水平21-22

    三.流式细胞仪检测细胞凋亡22-24

    四.Real time-PCR 法检测 Podocin mRNA 表达24-27

    附图 127-28

    附图 228-29

    附图 329-30

    第三章 讨论30-33

    第四章 结论33-34

    参考文献34-37

    综述37-45

    参考文献42-45

    个人介绍45-46

    致谢46

伤的意义机制。办法:1.将小鼠足细胞孵育于含50U/mLγ-干扰素,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素,10%(体积分数)胎牛血清的1640培养液中,33℃细胞培养箱中培养传代,然后将细胞转入不含γ-干扰素的10%胎牛血清1640培养液,37℃培养箱中诱导分化10~14d,倒置显微镜下观察细胞形态。2.将分化成熟的足细胞于不含胎牛血清的1640培养液中

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