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试析文蛤67kD层粘连蛋白受体及其调控通路在文蛤(Meretrixmeretrix)细胞生长和幼虫发育中的功能剖析学术论文模板(2)
胞原代培养112-1146.3.2 MmeLR dsRNA 和 siRNA 在文蛤原代细胞中的干扰效果114-1166.3.3 原代细胞基因转移条件的探索116-1176.3.4 MmeLR 在 HeLa 细胞系和 SF9 细胞系的转染效果117-1186.4 讨论118-122结论122-123参考文献123-145博士期间发表和完成的文章145-146个人简历146-147              上一页 1 2 
.3 MmeLR 原核重组表达和多克隆抗体制备62-63

3.2.2.4 实时定量 PCR(realtime PCR)63-64

3.2.2.5 Western blot assay64

3.2.2.6 Far-western analysis64-65

3.2.2.7 原代培养细胞 MmeLR 和 laminin 结合实验(binding assay)65

3.2.2.8 数据统计65-66

3.3 实验结果66-74

3.3.1 MmeLR 原核重组表达和多克隆抗体制备66-67

3.3.2 MmeLR 与其配体层粘连蛋白的相互意义67-68

3.3.2.1 层粘连蛋白在文蛤外套膜组织的表达67

3.3.2.2 rMmeLR 与 laminin 间的相互意义67-68

3.3.3 MmeLR 在文蛤不同组织中的表达状况68-70

3.3.4 MmeLR 在不同培养条件下的文蛤外套膜原代细胞中的表达70-72

3.3.4.1 文蛤外套膜原代细胞培养70

3.3.4.2 不同培养条件下文蛤原代细胞 MmeLR 的表达70-72

3.3.5 MmeLR 对原代细胞凋亡状况的影响72-74

3.4 讨论74-78

第4章 MmeLR 在文蛤幼虫发育历程中的功能分析78-94

4.1 引言78-79

4.2 实验材料与办法79-83

4.2.1 实验材料79-80

4.2.1.1 实验动物和样品收集79

4.2.1.2 实验所用引物79-80

4.2.1.3 实验所利用主要仪器和设备80

4.2.2 实验办法80-83

4.2.2.1 MmeLR siRNA 干扰幼虫实验80-81

4.2.2.2 RNA 提取和 cDNA 合成81-82

4.2.2.3 Realtime PCR82

4.2.2.4 数据统计82

4.2.2.5 Western blot assay82-83

4.2.2.6 幼虫免疫荧光实验83

4.3 实验结果83-91

4.3.1 MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的表达83-85

4.3.2 MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的蛋白表达定位85

4.3.3 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤胚胎发育85-87

4.3.4 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫组织发生分化87-88

4.3.5 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫的生长88-89

4.3.6 MmeLR 沉默对幼虫凋亡状况的影响89-91

4.4 讨论91-94

第5章 MmeLR 调控通路下游分子钙调蛋白对文蛤幼虫发育的影响94-106

5.1 引言94-95

5.2 实验材料与办法95-98

5.2.1 实验材料95-96

5.2.1.1 实验动物和样品收集95

5.2.1.2 实验所用引物95-96

5.2.1.3 实验所利用主要仪器和设备96

5.2.2 实验办法96-98

5.2.2.1 钙调蛋白抑制剂(TFP)处理幼虫实验96-97

5.2.2.2 RNA 提取和 cDNA 合成97

5.2.2.3 Realtime PCR97-98

5.2.2.4 数据统计98

5.3 实验结果98-103

5.3.1 MmeCaM 在文蛤幼虫不同发育阶段的表达状况98-99

5.3.2 MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤胚胎发育的影响99

5.3.3 MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤幼虫壳生成的影响99-100

5.3.4 MmeCaM 抑制剂 TFP 对文蛤幼虫附着的影响100-101

5.3.5 钙调蛋白抑制剂处理后 MmeCaM 和 MmeCaMKIV 表达量的变化101-103

5.4 讨论103-106

第6章 培养细胞中 RNAi 和过表达办法的探索106-122

6.1 引言106-107

6.2 实验材料与办法107-112

6.2.1 实验材料107

6.2.1.1 实验动物107

6.2.1.2 实验所用试剂配制107

6.2.1.3 实验所利用主要仪器和设备107

6.2.2 实验办法107-112

6.2.2.1 文蛤原代细胞培养办法107-108

6.2.2.2 HeLa 和 SF9 的培养办法108-109

6.2.2.3 dsRNA 的制备109

6.2.2.4 RNA 干扰实验109-110

6.2.2.5 实时定量 PCR(realtime PCR)110-111

6.2.2.6 数据统计111

6.2.2.7 Western blot111

6.2.2.8 转染质粒的构建111-112

6.2.2.9 转染实验112

6.3 实验结果112-118

6.3.1 文蛤血细胞、鳃细胞和肝胰脏细胞原代培养112-114

6.3.2 MmeLR dsRNA 和 siRNA 在文蛤原代细胞中的干扰效果114-116

6.3.3 原代细胞基因转移条件的探索116-117

6.3.4 MmeLR 在 HeLa 细胞系和 SF9 细胞系的转染效果117-118

6.4 讨论118-122

结论122-123

参考文献123-145

博士期间发表和完成的文章145-146

个人简历146-147

stern blot assay82-834.2.2.6 幼虫免疫荧光实验834.3 实验结果83-914.3.1 MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的表达83-854.3.2 MmeLR 在文蛤幼虫不同发育阶段的蛋白表达定位854.3.3 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤胚胎发育85-874.3.4 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫组织发生分化87-884.3.5 MmeLR siRNA 干扰影响文蛤幼虫的生长88-894.

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