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浅析脊髓PTEN抑制剂对脊髓损伤神经保护作用的机制论文

摘要:第一部分PTEN/mTOR信号通路相关蛋白在不同时期大鼠脊髓中的表达目的:本实验旨在阐述发育历程中大鼠脊髓PTEN/mTOR信号通路相关蛋白表达的变化。办法:E15、P0、P7、P56SPF级SD大鼠共42只。采取免疫荧光化学染色和Western blotting法分别检测脊髓组织中PTEN/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:Western blotting法结果显示,E15总PTEN表达量极少,PO时表达量明显增加,到P7时达到高峰,后又逐渐下降;Akt在整个历程表达量未见显著转变;免疫荧光化学染色法结果显示,脊髓前角PTEN阳性细胞数于出生后逐渐增加,且可见PTEN在细胞质及细胞核均有表达;而p-PTEN阳性细胞数逐渐减少;p-S6阳性细胞数呈逐渐减少。结论:大鼠脊髓发育历程中伴随着PTEN信号通路相关蛋白表达的变化。提示PTEN/mTOR信号通路可能对维持脊髓前角运动神经元的正常生长存在重要的意义。第二部分PTEN/mTOR信号通路相关蛋白在大鼠脊髓损伤后的表达目的:本实验旨在阐述PTEN/mTOR信号通路相关蛋白在大鼠实验性脊髓损伤后的表达、时间分布规律极为在脊髓损伤发生、进展中的意义。办法:成年SPF级36只SD大鼠(重量220±20g),对照组仅做椎板切除术,损伤组采取改良Allen's法制作大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型,分别于造模后1d、3d处死取材。采取免疫荧光化学染色和Western blotting法检测脊髓组织中PTEN/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,脊髓损伤后PTEN表达早期未见显著变化,3d时下降显著,而p-S6的表达早期也未见显著变化,3d时显著升高。脊髓损伤后大鼠脊髓前角神经元PTEN的表达阳性细胞数在3d时减少。结论:PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号转导通路中重要的调节位点PTEN在实验性脊髓损伤后的表达下降,而下游分子p-S6表达正好相反;提示该信号转导通路在介导实验性脊髓损伤的发生、进展的历程中可能起着重要意义。将PTEN作为靶点,使用其抑制剂进行干预可能对脊髓损伤产生保护意义。第三部分PTEN抑制剂对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响目的:观察PTEN抑制剂bpv(pic)对实验性大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。办法:成年SPF级60只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和药物组。其中,对照组仅做椎板切除术,损伤组采取改良Allen's法制作大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型,药物组损伤造模前通过腹腔注射PTEN抑制剂bpv(pic)(20μg/100g)。分别于伤后1d、3d处死取材,对脊髓损伤区行细胞凋亡TUNEL标记,同时采取BBB评分办法观察各组神经功能的恢复状况。结果:损伤组和药物组均可见到TUNEL阳性的凋亡细胞。药物组较损伤组凋亡阳性细胞数有所减少,且神经功能得到改进。两组相比在统计学上有明显性差别(P0.05)。结论:PTEN抑制剂bpv(pic)能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡,起到保护意义及推动大鼠神经功能的恢复。第四部分PTEN抑制剂对大鼠脊髓损伤后内源性干细胞的影响目的:观察PTEN抑制剂对脊髓损伤后内源性神经干细胞的影响。办法:成年SPF级30只SD大鼠随机分为对照组、损伤组和药物组。损伤后连续注射BrdU50mg/kg/d,持续7天。对照组仅做椎板切除术,损伤组采取改良Allen's法制作大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型。药物组损伤造模前通过腹腔注射PTEN抑制剂bpv(pic)(20μg/100g)。分别于伤后1d、3d处死取材,进行BrdU免疫组织化学染色分析。结果:大鼠SCI后1d、3d,损伤组和药物组BrdU阳性细胞数均增加,但药物组较损伤组阳性细胞数增加(P0.05)。结论:脊髓损伤能够激活内源性神经干细胞,PTEN抑制剂bpv(pic)i能够进一步推动内源性神经干细胞的增殖,并可能推动其向神经元分化。 关键词:PTEN论文 Akt论文 S6论文 大鼠论文 表达论文 PTEN论文 信号通路论文 实验性脊髓损伤论文 脊髓损伤论文 bpv(pic)论文 凋亡论文 PTEN论文 脊髓损伤论文 内源性神经干细胞论文 PTEN论文 bpv(pic)论文
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    中英文缩略词表7-9

    前言9-11

    摘要11-15

    Abstract15-19

    第一部分 PTEN/mTOR信号通路相关蛋白在不同时期大鼠脊髓中的表达19-37

    引言19-20

    材料与办法20-27

    结果27-30

    讨论30-33

    参考文献33-37

    第二部分 PTEN/mTOR信号通路相关

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