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浅论鱼腥草转抗菌肽基因与非转基因鱼腥草的mRNA及蛋白质差别学术论文下载

摘要:目的:为分析转基因鱼腥草非预期效应及进一步评价其安全性提供信息和论述依据,并为转基因中药的安全性评价提供参考,运用mRNA差别显示逆转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)技术从及蛋白质双向电泳技术,分别分析转基因与非转基因鱼腥草在mRNA及蛋白质水平的差别,研究转外源抗菌肽基因对鱼腥草转录组和蛋白质组的影响。办法:1.从相同生长条件、生长状态、生长阶段的转基因鱼腥草和非转基因鱼腥草叶片为材料,应用1nRNA DDRT-PCR技术,检测转基因与非转基因鱼腥草叶片之间的差别表达条带,对差别显著的条带进行回收,二次扩增,测序后,与GeneBank数据库中已知基因序列进行Blast同源搜索比对,寻找差别片段的同源基因或序列,并推测差别表达基因的功能。2.分别采取凯基试剂盒、三氯乙酸/丙酮沉淀法、尿素/硫脲提取法及酚法4种办法提取鱼腥草叶片总蛋白,对提取的蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)分析,筛选适合于鱼腥草叶片总蛋白的提取办法,建立鱼腥草叶总蛋白双向电泳系统。3.从相同生长条件、生长状态的转基因鱼腥草和非转基因鱼腥草叶片为材料,选用适合于鱼腥草叶片总蛋白的提取办法提取鱼腥草叶片总蛋白,对所提取的蛋白样品进行双向电泳(2-DE),2-DE凝胶图片经PDQuest软件分析,选取差别明显蛋白质点进行回收,使用质谱技术分析并与NCBI数据库搜索比对鉴定蛋白质。根据鉴定成功的蛋白质初步分析转基因对鱼腥草生理生化可能产生的影响。结果:1.对比转基因与非转基因鱼腥草植株mRNA DDRT-PCR的结果表明,在转基因与非转基因鱼腥草之间检测到70条差别表达条带,经片段回收,二次PCR及测序,共获得了20个差别片段序列,通过与GeneBank数据库中已知的基因序列进行Blast同源搜索比对,发现有8条差别表达片段序列与已知基因序列具有同源序列。2.通过蛋白得率、SDS-PAGE图谱和2-DE图谱筛选,结果表明,酚法和尿素/硫脲提取法提取的鱼腥草叶片总蛋白得率较高,SDS-PAGE图谱电泳条带多、清晰,2-DE图谱清晰、蛋白点多、分辨率高、图谱横竖纹少,适合于鱼腥草叶片总蛋白的制备。3.转基因和非转基因鱼腥草叶片总蛋白质双向电泳的结果表明:尿素/硫脲法共得到5个表达差别显著的蛋白质点;酚法共得到8个表达差别显著的蛋白质点。回收了其中5个差别蛋白质点,经质谱分析,有4个蛋白质点被成功鉴定,鉴定成功率为80%。其中有3个差别蛋白与叶片光合意义历程有关的核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加口氧酶具有同源性,有1个差别蛋白与新陈代谢历程有关的半胱氨酸合成酶具有同源性。结论:1.通过分析mRNA DDRT-PCR结果发现,转基因鱼腥草的mRNA表达和非转基因鱼腥草之间有着差别,对获得的差别片段进行同源性序列比对,发现差别片段的序列与已知植物基因有着高度同源性。表明转外源抗菌肽基因对鱼腥草的:mRNA产生了影响。2.通过鱼腥草叶片总蛋白质提取办法的筛选,尿素/硫脲提取法及酚法适合于鱼腥草叶片总蛋白质的提取;并建立了鱼腥草叶片总蛋白质双向电泳系统。3.通过双向电泳技术分析转基因与非转基因鱼腥草之间蛋白质水平差别,结果表明转外源基因对鱼腥草蛋白质组产生了影响,可为进一步分析转基因鱼腥草非预期效应从及安全性评价提供信息和论述依据。 关键词:转基因鱼腥草论文 非预期效应论文 mRNA差别序列分析论文 蛋白质差别论文 双向电泳论文 质谱论文 评价论文
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    中文摘要3-5

    Abstract5-7

    目录7-9

    引言9-11

    第一章 探讨背景与立题依据11-17

    1.1 转录组探讨概述11-13

    1.1.1 转录组和转录组学11

    1.1.2 转录组探讨的重要量11-12

    1.1.3 转录组探讨的办法12-13

    1.2 蛋白质组学探讨概述13-16

    1.2.1 蛋白质组和蛋白质组学13

    1.2.2 蛋白质组学的主要探讨技术13-16

    1.3 立题依据16-17

    第二章 转基因与非转基因鱼腥草叶片的DDRT-PCR分析17-36

    2.1 材料与办法17-24

    2.1.1 植物材料

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