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谈述蛋白结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位后其下游信号分子的筛选本科毕业论文致谢

摘要:目的:在结肠癌中,钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)的入核可从推动结肠癌的发生进展,在人结肠癌SW480细胞中,筛选出CacyBP/SIP核转位后与其相互意义的蛋白质。办法:构建pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒载体并且包装慢病毒上清,之后用病毒上清感染人SW480细胞,Westernblotting办法用来检测感染病毒后SW480细胞中融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3XNuclear targeting sequences和内源性CacyBP/SIP的蛋白表达状况。串联亲和层析法和免疫沉淀法被用来纯化与靶蛋白CacyBP/SIP相互意义的下游蛋白复合物,之后行质谱分析蛋白复合物的具体组成成分并分析数据结果。结果:CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒包装成功,病毒滴度为2×108TU/mL。 Western blotting办法以蛋白水平上证实了融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences在人SW480细胞的细胞核中的正确表达。串联亲和层析办法并未筛选与CacyBP/SIP相互意义的下游信号分子,但是以免疫沉淀法筛选的蛋白复合物质谱数据分析:肌动蛋白可能是与CacyBP/SIP相互意义的一个有作用蛋白分子。结论:1.成功包装CBP-SBP-cacyBP-3X-Nuclear targeting sequences慢病毒;2.慢病毒CBP-SBP-cacyBP-3X-Nuclear targeting sequences成功感染SW480细胞,融合蛋白在细胞核内成功表达;3肌动蛋白可能与CacyBP/SIP发生相互意义,推动结肠癌的发生进展。 关键词:CacyBP/SIP论文 TAP串联亲和层析论文 免疫沉淀论文
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    摘要2-3

    ABSTRACT3-8

    前言8-11

    第一部分 目的基因 CBP-SBP-CACYBP-3X-NUCLEAR TARGETING SEQUENCES 慢病毒的包装11-22

    前言11

    材料和办法11-18

    结果18-20

    讨论20-22

    第二部分 慢病毒感染人 SW480 细胞及融合蛋白 CBP-SBP-CACYBP-3X 在人SW480 细胞中的表达状况22-33

    前言22

    材料和办法22-28

    结果28-31

    讨论31-33

    第三部分 TAP 串联亲和层析法筛选与 CACYBP/SIP 相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱鉴定33-42

    前言33

    材料和办法33-37

    结果37-41

    讨论41-42

    第四部分 免疫沉淀(IP)筛选与 CACYBP/SIP 相互结合的下游信号蛋白分子并行质谱分析42-50

    前言42

    材料和办法42-44

    结果44-46

    讨论46-50

    结论50-51

    参考文献51-55

    综述55-61

    参考文献59-61

    致谢61-62

    攻读学位期间发表的学术论文目录62-63

    个人简历63

P核转位后与其相互意义的蛋白质。办法:构建pGC-FU-CBP-SBP-cacyBP-3X Nuclear targeting sequences慢病毒载体并且包装慢病毒上清,之后用病毒上清感染人SW480细胞,Westernblotting办法用来检测感染病毒后SW480细胞中融合蛋白CBP-SBP-cacyBP-3XNuclear targeting sequences和内源性CacyBP/SIP的蛋白表达状况。串联亲和层析法和

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