千果论文网
论文范文
千果论文网免费提供各类论文范文,专注 毕业论文、职称论文!7年服务经验,质量保证!
当前位置:千果论文网 >> 论文下载 >> 论文摘要范文 >>浏览文章
探究胶体赭曲霉毒素A的单克隆抗体制备及胶体金检测策略毕业论文格式

摘要:真菌毒素是由一些生长在谷物、干果、无花果、水果中的真菌产生的一类毒性化合物。和黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮一样,赭曲霉毒素A主要有着于谷物类作物及其制品、水果及其制品等食品中,是世界范围内污染较广、毒性较强的真菌类毒素之一,严重威胁人类的食品安全。然而,目前的检测策略大多需要专门的仪器设备,已无法满足现场快速检测的要求。由此,探讨和建立一种方便、安全和快速的赭曲霉毒素A检测策略作用深远。本实验采取活性酯法将赭曲霉素A(OTA)分别与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制 工抗原。以偶联抗原OTA-BSA免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,获得杂交瘤细胞。以偶联抗原OTA-OVA作为包被抗原,用ELISA策略对杂交瘤细胞进行筛选,有限稀释法对杂交瘤细胞做亚克隆,获得1株能稳定分泌抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3812。以间接ELISA策略测定腹水单抗效价为1:204800,3812单抗OTA的半数抑制浓度(IC50)为20ng/mL,与OTB、OTC、香豆素等结构类似物基本没有交叉反应;采取柠檬酸三钠还原法制备直径25nm的胶体金并标记抗OTA单克隆抗体作为检测试剂,单抗加入量为18μg/mL,标记pH制约在8.5左右,以1%BSA作稳定剂。试剂盒的检测灵敏度为5ng/mL。实验研制的赭曲霉毒素A胶体金免疫层析试剂盒最大的优点是检测快速、特异、灵敏、简便,5~10min内可出检测结果,适用于对OTA残留进行现场检测。 关键词:赭曲霉毒素A论文 单克隆抗体论文 胶体金论文 胶体金试剂盒论文
本论文由http://www.qqg88.com整理提供,需要 论文可以联系客服人员哦。

    中文摘要3-4

    Abstract4-8

    第一章 绪论8-22

    1 赭曲霉毒素A概述8-11

    1.1 赭曲霉毒素A介绍8

    1.2 OTA的产生菌和毒理8-10

    1.3 OTA限量标准10-11

    2 赭曲霉毒素A检测策略探讨进展11-14

    2.1 前处理策略11-13

    2.2 仪器浅析法13

    2.3 免疫学策略13-14

    3 胶体金技术概述14-19

    3.1 免疫胶体金技术的基本原理14-15

    3.2 胶体金的制备、标记和纯化15-17

    3.3 试纸条的结构和原理17-18

    3.4 胶体金技术在食品安全检测领域的运用近况及前景18-19

    4 本课题的探讨内容和技术路线19-22

    4.1 本课题的探讨内容19-20

    4.2 技术路线20-22

    第二章 OTA人工抗原的合成与鉴定22-28

    1 材料与策略22-24

    1.1 材料22-23

    1.2 策略23-24

    2 结果24-26

    2.1 紫外扫描及偶联比估算结果24-25

    2.2 偶联物的浓度25-26

    3 讨论26-27

    4 小结27-28

    第三章 OTA单克隆抗体的制备与鉴定28-41

    1 材料28-30

    1.1 主要仪器设备28

    1.2 主要试剂及耗材28-29

    1.3 实验动物与细胞29

    1.4 主要溶液系统29-30

    2 策略30-34

    2.1 动物免疫30-31

    2.2 间接ELISA检测抗血清及单抗效价策略的建立31-32

    2.3 间接竞争ELISA抑制试验筛选阳性孔32

    2.4 饲养细胞的制备32

    2.5 细胞融合与阳性克隆的筛选32-33

    2.6 细胞冻存及复苏33

    2.7 单克隆抗体的制各33

    2.8 单克隆抗体间接ELISA效价的测定33-34

    2.9 单抗亚型的鉴定34

    2.10 腹水中抗体蛋白含量的测定34

    2.11 OTA标准抑制曲线的绘制34

    2.12 单抗交叉反应性34

    3 实验结果34-38

    3.1 间接ELISA策略的建立34-35

    3.2 免疫小鼠抗OTA血清效价35-36

    3.3 抑制试验结果36

    3.4 细胞融合及亚克隆36-37

    3.5 腹水单抗制备、抗体效价及分型测定37

    3.6 直接竞争ELISA法标准抑制曲线的绘制37-38

    3.7 单抗交义反应性测定38

    4 讨论38-40

    4.1 免疫方式38-39

    4.2 细胞融合39

    4.3 杂交瘤细胞的冻存及复苏39

    4.4 单克隆抗体的大量制备及纯化39-40

    5 小结40-41

    第四章 OTA金标免疫层析试剂盒的制备41-52

    1 材料41-43

    1.1 主要仪器设备41

    1.2 主要试剂及耗材41

    1.3 主要溶液系统41-43

    1.4 器具的处理43

    2 实验策略43-48

    2.1 胶体金的制备43

    2.2 胶体金的鉴定43-44

    2.3 金标抗体的制备及纯化44-45

    2.4 玻璃纤维膜和硝酸纤维素膜的包被45

    2.5 金标免疫层析试剂盒的组装45-46

    2.6 试剂盒的检测策略及结果判定46-47

    2.7 金标免疫层析试剂盒的性能测定47-48

    3 结果48-50

    3.1 胶体金的制备48

    3.2 胶体金标记单抗结果48-49

    3.3 金标免疫层析试剂盒的性能鉴定49-50

    4 讨论50-51

    5 小结51-52

    第五章 主要结论52-53

    参考文献53-57

    致谢57-58

    个人介绍58

千果论文网专注 毕业论文与职称论文以及论文 表业务,如有需要请联系客服人员!