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谈谈花青素异源表达花青素生物合成相关转录因子提高油菜抗氧化能力毕业论文致谢格式
的抗氧化活性,能够保护植物抵御胁迫和非胁迫条件的损伤。花青素也可作为天然的食用色素,具有抗氧化、预防心脑血管疾病和抑制肿瘤细胞发生等多种重要功能,在食品、医药、保健品等方面有着巨大的运用潜力。花青素生物合成途径中的C4H,CHS,F3H,DFR和ANS等5个结构基因在其生物合成历程中扮演着重要角色。此外,花青素生物合成受到
摘要:探讨背景:花青素是一类最大、最重要的水溶性色素,广泛分布于植物中。它是类黄酮化合物的衍生物,决定着植物组织和蔬菜的颜色。花青素具有良好的抗氧化活性,能够保护植物抵御胁迫和非胁迫条件的损伤。花青素也可作为天然的食用色素,具有抗氧化、预防心脑血管疾病和抑制肿瘤细胞发生等多种重要功能,在食品、医药、保健品等方面有着巨大的运用潜力。花青素生物合成途径中的C4H,CHS,F3H,DFR和ANS等5个结构基因在其生物合成历程中扮演着重要角色。此外,花青素生物合成受到MYB和bHLH等转录因子的调控,Depla和Roseal1分别属于bHLH和MYB转录因子。油菜是全世界广泛种植的油料作物,是一种重要的经济作物。菜籽油对人类的健康非常有益,并且油菜叶中还含有抗氧化酚。但是,油菜的抗氧化力较低。目前,尚未有关于异源表达花青素生物合成转录因子提升油菜抗氧化能力的报道。探讨目的:本探讨以金鱼草中克隆花青素生物合成转录因子Roseal1和Depla,构建超表达载体pBin19-Del-Ros1,通过农杆菌介导转化油菜以提升油菜的花青素含量,以而提升油菜的抗氧化能力。探讨策略和结果:提取金鱼草总RNA,通过RT-PCR克隆了Del和Ros1,然后克隆到pBin19载体构建了超表达载体pBin19-Del-Ros1。将pBin19-Del-Ros1转化到农杆菌,利用农杆菌介导转化油菜,获得了具有紫色表型的转基因油菜植株OxDel/Ros1-Z1和OxDel/Ros1-Z2。花青素含量测定浅析表明,转基因植株花青素含量超过0.0711mg/g FW,是野生型植物花青素含量的10倍。定量PCR浅析表达方式表明,花青素生物合成下游结构基因F3H,DFR和ANS的表达量上调,而上游结构基因C4H和CHS的表达则受到了转录因子Del和Ros1的抑制。此外,转基因油菜植株中Del和Ros1的表达量很高,野生型油菜植株中没有表达。总抗氧化活性测定显示,转基因油菜植株的抗氧化能力超过5.69mmol Trolox/Kg FW,是野生型油菜植株的3倍多。探讨作用:本探讨提供了一种提升油菜抗氧化性的新策略。其次,本探讨对探讨花青素的生物合成调控机制具有重要的论述作用。最后,本探讨为利用基因工程技术生产花青素奠定了基础。探讨结论:通过异源表达花青素生物合成转录因子Del和Ros1可显著增加油菜花青素的含量,提升油菜的抗氧化能力。 关键词:花青素论文 转录因子论文 抗氧化活性论文 油菜论文
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    摘要3-4

    ABSTRACT4-8

    缩略词表8-9

    1 绪论9-20

    1.1 不足的提出及探讨的作用9-10

    1.1.1 不足的提出9

    1.1.2 探讨的作用9-10

    1.2 国内外探讨近况10-18

    1.2.1 花青素10

    1.2.2 植物花青素的生物合成途径10-12

    1.2.3 植物花青素的生物合成的分子调控机制12-13

    1.2.4 植物花青素的生物合成的转录因子探讨进展13-18

    1.3 本论文探讨的目的和探讨内容18-20

    1.3.1 本论文探讨的目的18-19

    1.3.2 本论文探讨的技术路线19

    1.3.3 探讨内容19-20

    2 材料与策略20-37

    2.1 实验材料20

    2.1.1 质粒和菌株20

    2.1.2 主要仪器设备20

    2.2 实验策略20-37

    2.2.1 实验用液及配制20-22

    2.2.2 主要分子生物学试剂和试剂盒22

    2.2.3 总 RNA 的提取及电泳检测22-23

    2.2.4 DNA 的胶回收纯化23

    2.2.5 DNA 的柱式快速纯化23-24

    2.2.6 质粒 DNA 的转化24

    2.2.7 碱裂解法抽提质粒 DNA24

    2.2.8 Depla 和 Rosea1 基因的反转录 PCR 扩增及测序浅析24-27

    2.2.9 超表达载体的构建27-31

    2.2.10 农杆菌感受态的制备及转化31

    2.2.11 甘蓝型油菜遗传转化31-32

    2.2.12 转基因植株的分子定性检测32-33

    2.2.13 花青素含量的测定33-34

    2.2.14 转基因植株的定量 PCR 检测34-35

    2.2.15 花青素的总抗氧化活性检测35-37

    3 结果与浅析37-55

    3.1 总 RNA 提取37

    3.2 表达载体 pBin19-Del-Ros1 的构建37-47

    3.2.1 pBin19-Del-Ros1 载体构建路线图37-39

    3.2.2 Del 和 Ros1 基因的克隆39-42

    3.2.3 pDH51-Del 和 pDH51-Ros1 载体的构建42-43

    3.2.4 pBin19-Del-Ros1 载体的构建43-47

    3.3 遗传转化油菜47-50

    3.3.1 受体的选择47-48

    3.3.2 愈伤组织的生成48-49

    3.3.3 愈伤组织的分化49

    3.3.4 植株的生成49-50

    3.4 转基因植株的分子定性检测50-51

    3.5 花青素含量的测定51

    3.6 转基因植株的定量 PCR 浅析51-53

    3.7 花青素的总抗氧化活性检测53-55

    4 结论与展望55-57

    4.1 主要结论55

    4.2 后续探讨工作55-57

    致谢57-58

    参考文献58-63

    附录63

    A:作者攻读硕士学位期间发表的论文63

    B:作者攻读硕士学位期间参与的课题63

 转基因植株的分子定性检测50-513.5 花青素含量的测定513.6 转基因植株的定量 PCR 浅析51-533.7 花青素的总抗氧化活性检测53-554 结论与展望55-574.1 主要结论554.2 后续探讨工作55-57致谢57-58参考文献58-63附录63A:作者攻读硕士学位期间发表的论文63B:作者攻读硕士学位期间参与的课题63              

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