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阐述散射共振光散射技术在生物大分子的痕量测定中的运用中国论文中心论文,

摘要:上世纪九十年代之前,生物大分子的测定主要采取的荧光法和分光光度法,但各自都有着问题。荧光法受探针类型的限制,无荧光性质的药物无法利用此办法对大分子进行测定,而几点有荧光的药物价格很昂贵甚至是有毒,并不适合被广泛运用于生物化学或医药界;分光光度法灵敏度较低、容易受到干扰,并且很耗时。共振光散射(Resonance Light Scattering,简称RLS)技术从其操作简便、仪器简单、灵敏度高、探针种类丰富从及省时的优点被人们认知,所从越来越多的探讨人员把目光转向了用新兴的共振光散射办法定量测定核酸、糖类从及蛋白质等生物大分子。DNA与小分子的结合模式主要有三种:嵌入式、沟槽式和静电引力。表面活性剂可从增强溶液表面活性,敏化共振光散射强度,通过静电引力可从与DNA很好的结合。阳离子表面活性剂早已被作为测定DNA的探针运用,故本论文将其应用到共振光散射光谱法的探讨中。本论文对运用共振光散射技术测定生物大分子的办法进行细致的探讨,并建立了四种简便、快速、灵敏的测定鲑鱼精DNA的共振光散射探针,主要内容如下:应用黄酮类中药有效成分(柚皮素/橙皮素/芹菜素)-CTAB探针测定DNA。在三元系统中,CTAB从“桥联”的模式连接了带有负电荷的DNA和解离后的这一种中药有效成分,并且形成体积更大的三元配合物,引起共振光散射显著增强。在实验获得的最佳条件下、在较宽的DNA浓度范围内,中药有效成分-CTAB能够增强DNA的RLS信号,且信号的增强值与DNA浓度成正比。应用建立的共振光散射光谱分析法分析DNA-CTAB-柚皮素系统,DNA在0.017~(-1).7μg mL1浓度范围内时,353nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性联系。得到线性方程IRLS1.3943.3C(C,μg mL~(-1))。相联系数r为0.9944,检出限为5.06ng mL~(-1)。合成样品回收率为99.3~(-1)05.0%,相对标准偏差RSD为0.54~(-1).16%。对于DNA-CTAB-橙皮素系统,DNA在0.022-4.4μg mL1浓度范围内时,363nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性联系。得到线性方程IRLS3.11289.025C(C,μg mL~(-1))。相联系数r为0.9996,检出限为2.34ng mL~(-1)。合成样品回收率为97.3~(-1)01.9%,相对标准偏差RSD为0.54~(-1).16%。对于DNA-CTAB-芹菜素系统,DNA在0.013-4.4μg mL1浓度范围内时,433nm处增强的RLS信号与DNA浓度呈良好线性联系。得到线性方程I1RLS5.6448.086C(C,μg mL-)。相联系数r为0.9975,检出限为2.97ng mL~(-1)。合成样品回收率为101.2~(-1)09.5%,相对标准偏差RSD为1.82-4.74%。探讨了蒽醌类化合物大黄素在弱酸与弱碱条件下的不同解离模式,并从大黄素-CPB作探针测定DNA。CPB从静电引力意义结合DNA与大黄素,致使RLS信号明显增强。在获得的最佳实验条件下,340nm处增强的共振光散射信号强度IRLS与DNA浓度在0.01-2.72μg mL~(-1)范围内呈现良好线性联系,因此建立一种定量检测DNA的共振光散射分析办法。此办法的线性回归方程为IRLS28.68118.35C(C,μg mL~(-1)),相联系数r为0.9923,检出限(3σ)为1.5ngmL~(-1)。该办法成功用于人工合成样品的的测定。样品回收率为97.6~(-1)07.3%,相对标准偏差为3.8-5.2%。 关键词:DNA论文 阳离子表面活性剂论文 中药有效成分论文 共振光散射论文
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    摘要4-6

    Abstract6-10

    第1章 前言10-20

    1.1 测定核酸的主要办法11-13

    1.1.1 分光光度法11-12

    1.1.2 荧光分析法12-13

    1.2 共振光散射光谱法13-14

    1.2.1 光散射现象13

    1.2.2 共振光散射法原理13-14

    1.2.3 共振光散射光谱法的进展14

    1.3 共振光散射光谱法测定 DNA14-18

    1.3.1 DNA14-15

    1.3.2 DNA 与小分子的相互意义15-16

    1.3.3 DNA 的 RLS 测定运用16-18

    1.4 本文探讨的主要内容18-20

    第2章 DNA-CTAB-柚皮素三元系统的共振光散射光谱性质的探讨与运用20-33

    2.1 柚皮素与 CTAB 的结构与特性21-22

    2.1.1 柚皮素的结构与特性21

    2.1.2 CTAB 的结构与特性21-22

    2.2 实验部分22-23

    2.2.1 仪器与试剂22-23

    2.2.2 实验办法23

    2.2.3 仪器参数23

    2.3 结果与讨论23-33

    2.3.1 DNA-CTAB-柚皮素系统共振光散射光谱探讨23-25

    2.3.2 紫外可见吸收光谱25-26

    2.3.3 实验条件的优化26-32

    2.3.4 样品分析32-33

    第3章 DNA-CTAB-橙皮素/芹菜素系统共振光散射光谱的探讨33-47

    3.1 橙皮素与芹菜素的结构与特性33-34

    3.1.1 橙皮素的结构与特性33

    3.1.2 芹菜素的结构与特性33-34

    3.2 实验部分34-36

    3.2.1 仪器与试剂34-35

    3.2.2 实验办法35

    3.2.3 仪器参数35-36

    3.3 结果与讨论36-47

    3.3.1 系统的共振光散射光谱特点36-38

    3.3.2 紫外可见光谱38-39

    3.3.3 实验条件的优化39-46

    3.3.4 样品分析46-47

    第4章 DNA-CPB-大黄素系统的光谱探讨47-61

    4.1 大黄素与 CPB 的结构与特性47-48

    4.1.1 大黄素的结构与特性47

    4.1.2 CPB 的结构与特性47-48

    4.2 实验部分48-50

    4.2.1 仪器与试剂48-49

    4.2.2 实验办法49

    4.2.3 仪器参数49-50

    4.3 结果与讨论50-61

    4.3.1 系统的共振光散射光谱特点50-51

    4.3.2 系统的紫外可见光谱51-53

    4.3.3 实验条件的优化53-60

    4.3.4 样品分析60-61

    结论61-63

    参考文献63-73

    作者攻读硕士学位期间主要探讨成果73-75

    致谢75

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