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简论蛋白菜心(BrassicaparachinensisBailey)乙醇酸氧化酶与富含苯丙氨酸的蛋白的联系论文大纲怎么写
 GO基因表达调控15-161.3 GO翻译后的转运与组装16-171.3.1 GO翻译后的转运16-171.3.2 GO翻译后的组装171.4 GO的分子结构17-191.4.1 GO的一级结构171.4.2 GO的高级结构17-191.4.3 GO活性中心的结构191.5 GO分子结构与pI的矛盾及相关论述的提出19-211.5.1 GO分子结构与pI的矛盾19-201.5.2 GO同工酶论述的提出及其疑点20-211.6
摘要:乙醇酸氧化酶(EC 1.1.3.15,GO)是植物光呼吸的关键酶,由一种分子量(Mr)为40kD的亚基构成。针对前人对GO探讨发现的GO单一分子结构与多个等电点(pI)之间的矛盾,本实验组在前期工作中已初步证实GO可以与一种富含苯丙氨酸的蛋白结合形成GO复合蛋白。本论文在此基础上以免疫杂交为主要手段,对GO复合蛋白的组成、GO与富含苯丙氨酸蛋白的相互联系、富含苯丙氨酸蛋白的性质及其对GO电泳行为的影响进行了探讨,主要结果如下:通过10%醋酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-50分子筛柱层析、DEAE-cellulose-52离子交换柱层析,以菜心(Brassica parachinensis Bailey)绿叶中获得具有GO活性、pI>8.3的GO复合蛋白。该GO复合蛋白在SDS-PAGE中呈Mr为40kD的单带。经醋酸纤维素薄膜电泳浅析表明,GO复合蛋白中含有在SDS变性下向负极泳动的蛋白成分。氨基酸组成测定的结果表明,向负极泳动的蛋白富含苯丙氨酸,其含量达12.96%。GO复合蛋白经SDS变性后,进行Sephadex G-100凝胶过滤得到两种蛋白组分:GC-Ⅰ和GC-Ⅱ。凝胶过滤曲线表明GC-Ⅰ的Mr约为67kD;GC-Ⅱ的Mr介于14kD和67kD之间。而GC-Ⅰ经SDS-PAGE后出现Mr分别为40kD和14kD的两条带,或只出现Mr为40kD的一条带;GC-Ⅱ在SDS-PAGE中则出现Mr为14kD的一条带,或者未出现任何条带。该结果表明Mr为14kD的蛋白与GO有密切联系。用GO 40kD亚基抗体和GO复合蛋白抗体对GO复合蛋白作斑点杂交和SDS-PAGE Western-blot浅析,发现GO 40kD亚基抗体可以识别非SDS变性的GO复合蛋白,而GO复合蛋白抗体对SDS变性下GO的40kD亚基识别能力很弱。据此推测:富含苯丙氨酸的蛋白主要位于GO复合蛋白的外部,而GO主要位于内部;富含苯丙氨酸的蛋白不完全包被GO,其掩盖了GO的抗原决定簇。用GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白作SDS-PAGE Western-blot浅析,杂交主带为54kD和14kD,表明粗蛋白中54kD和14kD的蛋白与GO复合蛋白有免疫源性。以粗蛋白中回收上面陈述的54kD和14kD的蛋白,用GO复合蛋白抗体进行SDS-PAGE Western-blot浅析,膜上出现Mr以30kD~97kD的一系列阶梯状杂交条带,条带密集处位于97kD和54kD附近。该结果说明GO复合蛋白与SDS的结合比例是可变的,在SDS-PAGE中呈现出多种迁移率。制备菜心绿叶粗蛋白中14kD蛋白的抗体,用该抗体对GO复合蛋白进行斑点杂交和SDS-PAGE Western-blot浅析,发现14kD蛋白抗体可以识别非SDS变性的GO复合蛋白,但不能识别SDS变性下GO的40kD亚基,表明Mr为14kD的蛋白可能是GO复合蛋白中富含苯丙氨酸的蛋白。用GO 40kD亚基抗体、GO复合蛋白抗体、14kD蛋白抗体对GO复合蛋白进行SDS-醋酸纤维素薄膜免疫杂交浅析,发现GO复合蛋白经SDS变性处理后,其中GO同时向正极和负极泳动,而富含苯丙氨酸的蛋白主要向负极泳动。 关键词:菜心论文 乙醇酸氧化酶论文 富含苯丙氨酸的蛋白论文 14kD蛋白论文 免疫杂交论文
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    摘要5-7

    Abstract7-9

    缩写词9-10

    目录10-13

    1 前言13-25

    1.1 GO的分布13-14

    1.1.1 GO在高等植物中的分布13-14

    1.1.2 GO在低等植物中的分布14

    1.1.3 GO在动物中的分布14

    1.2 GO基因的克隆及其表达调控14-16

    1.2.1 GO基因的克隆14-15

    1.2.2 GO基因的异源表达15

    论文摘要

    1.2.3 GO基因表达调控15-16

    1.3 GO翻译后的转运与组装16-17

    1.3.1 GO翻译后的转运16-17

    怎样写开题报告

    1.3.2 GO翻译后的组装17

    1.4 GO的分子结构17-19

    1.4.1 GO的一级结构17

    1.4.2 GO的高级结构17-19

    1.4.3 GO活性中心的结构19

    1.5 GO分子结构与pI的矛盾及相关论述的提出19-21

    1.5.1 GO分子结构与pI的矛盾19-20

    1.5.2 GO同工酶论述的提出及其疑点20-21

    1.6 GO与其他蛋白相互联系的探讨21-23

    怎样写开题报告

    1.6.1 GO与富含苯丙氨酸的蛋白紧密结合21-23

    1.6.2 与GO相关的富含苯丙氨酸的蛋白在SDS变性下向负极泳动的现象23

    1.7 本论文探讨目的23-25

    2 材料与策略25-32

    2.1 实验材料25

    2.2 实验试剂25

    2.3 主要仪器25-26

    2.4 实验策略26-32

    2.4.1 蛋白含量测定26

    2.4.2 层析柱的装柱和再生26

    2.4.3 4%~20% SDS-PAGE26-27

    2.4.4 SDS-醋酸纤维素薄膜电泳27

    2.4.5 GO复合蛋白的提取27-28

    2.4.6 GO复合蛋白中GO活性的测定28-29

    2.4.7 GO 40kD亚基的制备29

    2.4.8 GO复合蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的蛋白的制备29

    2.4.9 粗蛋白中54kD蛋白和14kD蛋白的制备29

    2.4.10 蛋白抗体制备29-30

    毕业论文范文

    2.4.11 SDS-PAGE Western blot30

    2.4.12 醋酸薄膜免疫杂交30

    2.4.13 斑点杂交30-31

    怎样写提纲

    2.4.14 GO复合蛋白SDS-Sephadex G-100凝胶过滤31

    2.4.15 蛋白氨基酸组成测定31-32

    3 结果与浅析32-51

    3.1 蛋白质含量标准曲线测定32

    3.2 GO复合蛋白的提取32-33

    3.3 GO复合蛋白特性浅析33-40

    3.3.1 GO复合蛋白蛋白含量测定及GO活性检测33-34

    3.3.2 GO复合蛋白SDS-PAGE浅析34-36

    3.3.3 GO复合蛋白SDS-醋酸纤维素薄膜电泳浅析36-37

    3.3.4 GO复合蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的蛋白的获得及其氨基酸组成浅析37-38

    3.3.5 GO复合蛋白SDS变性后Sephadex C-100凝胶过滤浅析38-40

    3.4 GO复合蛋白中GO与富含苯丙氨酸的蛋白的联系浅析40-51

    3.4.1 GO 40RD亚基抗体对GO复合蛋白作斑点杂交以及SDS-PAGE Western-blot浅析40-42

    3.4.2 GO复合蛋白抗体对GO复合蛋白作斑点杂交以及SDS-PAGE Western-blot浅析42-45

    3.4.3 GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白作SDS-PAGE Western-blot浅析45-46

    3.4.4 GO复合蛋白抗体对菜心绿叶粗蛋白中54kD蛋白和14kD蛋白作SDS-PAGE Western-blot浅析46-47

    3.4.5 14kD蛋白抗体制备及其免疫杂交浅析47-49

    3.4.6 GO复合蛋白SDS变性后醋酸纤维素薄膜免疫杂交浅析49-51

    4 讨论与结论51-57

    4.1 讨论51-56

    4.1.1 GO复合蛋白是由GO和富含苯丙氨酸的蛋白构成51-52

    4.1.2 GO复合蛋白中GO与富含苯丙氨酸蛋白的空间位置联系52

    4.1.3 富含苯丙氨酸的蛋白可能是Mr为14kD的蛋白52-53

    4.1.4 富含苯丙氨酸的蛋白引起GO复合蛋白与SDS结合能力的变化53-54

    4.1.5 GO复合蛋白向负极泳动的组分鉴定及其机理浅析54-55

    怎样写摘要

    4.1.6 富含苯丙氨酸的蛋白有着的功能和作用55-56

    4.2 结论56-57

    怎样写论文

    参考文献57-65

    附录65-66

    论文

    致谢66-67

毕业论文

构与pI的矛盾及相关论述的提出19-211.5.1 GO分子结构与pI的矛盾19-201.5.2 GO同工酶论述的提出及其疑点20-211.6 GO与其他蛋白相互联系的探讨21-231.6.1 GO与富含苯丙氨酸的蛋白紧密结合21-231.6.2 与GO相关的富含苯丙氨酸的蛋白在SDS变性下向负极泳动的现象231.7 本论文探讨目的23-252 材料与策略25-322.1 实验材料252.2 实

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