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试谈罗非鱼吉富罗非鱼精原干细胞分离与体外培养的写毕业论文经典的网站

摘要:精子的发生是一个复杂而精细的历程,精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)在雄性性腺中受神经内分泌和环境因子的协同意义而有条不紊的进行自我更新和分化,从维持机体正常的生精功能。精子作为向子代传递遗传信息的载体是进行遗传物质改良的最好材料,而生殖干细胞又是形成精子的前提细胞,可使用基因工程技术生产饲料转化率高、抗病力强及具有优质蛋白质的转基因动物。尽管人们对精子发生的一般历程和调节机制有所了解,但对多数动物精子发生的特征和调节机制仍然认识不清楚。由此在体外模拟雄性动物性腺微环境培养SSCs对揭秘精子的发生历程和调节机制具有重要作用,为体外生产精子并从精子为载体生产转基因细胞、组织和动物提供材料和技术,不仅可保护濒临灭绝的遗传资料也可从生产具有商业价值的新品种或转基因动物。哺乳动物SSCs体外分离、克隆及诱导等的探讨取得了较大的发展,而鱼类SSCs的探讨仅限于斑马鱼和青鳉鱼等少数鱼类,国内罗非鱼SSCs体外分离培养的相关探讨鲜有报道,关于罗非鱼SSCs分离、克隆及冻存的办法还需进一步优化和研究,由此本探讨从雄性吉富罗非鱼为模型动物,取精巢为试验材料做如下探讨:1.采取不同消化液和不同分离办法获得SSCs和SCs,研究CO_2和Hepes浓度对罗非鱼精巢细胞原代培养时的影响,然后以形态学及HE、油红O及AKP染色等办法对SSCs和SCs做初步的鉴定;2.用差速贴壁法、克隆环法和机械法对SSCs和SCs进行纯化,用不同饲养层培养罗非鱼SSCs并选择出有利于SSCs增殖的饲养层,然后研究分别添加吉富罗非鱼精巢提取液、斑马鱼胚胎提取液、EGF或bFGF时,对从SCs为饲养层培养的SSCs增殖的影响,并绘制生长曲线,从建立吉富罗非鱼SSCs的扩增系统;3.用不同的冻存液和降温模式冻存吉富罗非鱼SSCs和SCs,然后用相同的办法解冻并检测SSCs和SCs的解冻生存率,最后选择出有利于SSCs和SCs冷冻保存的冻存液和降温模式。试验结果表明:1.用胰蛋白酶消化吉富罗非鱼精巢组织后所得的总细胞数和活细胞数都明显高于0.1%胶原酶Ⅳ和0.04%EDTA·Na_2(P0.05),而首次贴壁时间比0.1%胶原酶Ⅳ和0.04%EDTA·Na_2组显著缩短(P0.05);胰蛋白酶组与组合酶(胶原酶和胰蛋白酶,下同)组相比总细胞数、活细胞数和首次贴壁时间都无

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