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论南瓜美洲南瓜(Cucurbitpepo)WMV-2抗性遗传及分子标记论文写法

摘要:近年来随着南瓜的经济价值越来越被人们所重视,南瓜栽培面积不断扩大,南瓜病毒病危害日益加重,特别在高温干旱年份发病尤为严重,给南瓜的生产造成严重的经济损失。病毒病可从通过蚜虫从及机械模式传播,药剂防治成本高、效果差,并且污染果实和环境。由此培育抗病品种被认为是最有效、可持续进展且对环境无污染的途径。深入了解抗病毒病基因的遗传机制,找出遗传方式的信息,并能将抗病基因导入优良品种或通过对抗病品种的筛选采取杂交模式培育出优良品种是很有必要的。而分子标记技术是抗性基因筛选和鉴定的最有用工具之一。本探讨从美洲南瓜(Cucurbita pepo)抗病自交系‘0504’与感病自交系‘0223’杂交后自交所得的F_2代分离群体为材料,采取分离群体分析法(Bulkedsegregant Analysis, BSA),筛选与南瓜病毒病抗性基因连锁的SSR分子标记,进行分子标记辅助育种。主要结果如下:(1)采取RT-PCR办法鉴定南瓜病毒病的病原。根据已经报道的南瓜病毒外壳蛋白基因序列设计合成引物,从感病叶片和健康叶片总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增。以感病叶片中扩增出约800bp左右的特异性片段而健康叶片无此扩增产物,对目标特异性片段进行测序,在Genbank上进行核酸和氨基酸序列的比对分析,与西瓜花叶病毒-2号(WMV-2)的外壳蛋白基因序列的核苷酸序列同源性达95%,确定该南瓜病毒为WMV-2。(2)采取常规接种办法对父母本、F_1和F_2群体进行人工接种鉴定,结果显示,F_1代全部发病,在157株F_2代植株中,有36株体现为抗病,121株体现为感病,经过卡方检测F_2对该病毒的抗性分离状况基本上符合1:3的分离比例。推测美洲南瓜对WMV-2抗性为隐性单基因制约。(3)使用适合南瓜的SSR分子标记反应系统,以352对来自于南瓜基因组的SSR引物对筛选出114对在双亲间体现出多态性的引物,多态性为32.4%;以60对与南瓜近缘的黄瓜SSR引物筛选出5对在双亲间体现出多态性的引物,多态性为8%。(4)以F_2代分离群体中选用高抗和高感的单株各10株分别构成抗感基因池。使用SSR标记和BSA法,以在亲本间具有多态性的119对SSR引物中找到两个与南瓜WMV-2抗性相关基因相连锁的标记(CMTm158和CMTm157),这两个标记通过对F_2单株进行验证,检测F_2抗病单

失。病毒病可从通过蚜虫从及机械模式传播,药剂防治成本高、效果差,并且污染果实和环境。由此培育抗病品种被认为是最有效、可持续进展且对环境无污染的途径。深入了解抗病毒病基因的遗传机制,找出遗传方式的信息,并能将抗病基因导入优良品种或通过对抗病品种的筛选采取杂交模式培育出优良品种是很有必要的。而分子标记技术是

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