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试述淋巴细胞高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性树突状细胞免疫功能影响的实验毕业论文摘要
加,抑制IL-12的合成、释放,诱导DCreg表面共刺激分子表达减弱,HMGB1可能是诱导DCreg功能分化的重要免疫刺激信号。2. HMGB1诱导的DCreg使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应显著抑制,并推动T淋巴细胞向Th2功能性极化,抑制IL-2的合成、释放。3. HMGB1能上调DCreg受体TLR4表达,TLR4可能是参与HMGB1诱导DCreg功能分化的主要受体之
摘要:目的:高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为一种晚期炎症介质,介导了脓毒症和其他全身炎症的致死性效应,探讨其病理生理作用与作用将有助于深化对脓毒症发病机制的认识,并为免疫反应的调控提供潜在的干预目标。本实验拟采取HMGB1体外刺激小鼠脾脏调节性树突状细胞(DCreg),重点围绕HMGB1对DCreg免疫功能的影响及其受体机制进行初步探讨,旨在为脓毒症及多器官功能障碍综合征的预防和治疗提供新思路。策略:1.分离培养正常Balb/c小鼠脾脏DCreg(CD11c~(low)CD45RB~(high)DCs),采取不同剂量的HMGB1(10、100、1000ng/ml)刺激12小时,并以100ng/ml HMGB1于不同时间点(2、12、24小时)刺激,观察HMGB1刺激与DCreg分泌白细胞介素(IL)-10和IL-12水平、表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和主要组织相容性复合物(MHC)-II表达的剂量-效应联系及时间-效应联系。采取ELISA法检测上清中IL-10和IL-12水平,DCreg共刺激分子表达采取流式细胞仪浅析。2. DCreg经100ng/ml的HMGB1刺激12小时后,与脾T淋巴细胞以1:100的细胞比例混合培养,于共同作用后3天观察T淋巴细胞增殖反应、功能性极化(Th1/Th2)、IL-2表达情况。3. HMGB1刺激后,分别采取流式细胞术和PCR技术检测DCreg表面Toll样受体(TLR)4的表达,进一步观察封闭TLR4受体对HMGB1刺激后DCreg分泌IL-10和IL-12水平、以及对T淋巴细胞增殖反应、功能性极化、IL-2表达的影响。结果:1. HMGB1对小鼠脾脏DCreg功能的影响:(1)HMGB1刺激后,DCreg分泌IL-10、IL-12水平于12~24小时分别显著升高和下降(P0.01),其中以作用12小时后达稳态;10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml的HMGB1刺激均可诱导DCregIL-10、IL-12分泌水平分别显著上升和下降(P0.01),其中HMGB1的浓度为100ng/ml时,DCreg分泌IL-10、IL-12趋于稳定。(2)与正常对照组相比,100ng/ml的HMGB1刺激DCreg12小时后,表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC-II表达均显著下调(P0.01)。2. HMGB1诱导的DCreg对小鼠脾T淋巴细胞功能的影响:HMGB1诱导的DCreg与T淋巴细胞以1:100的比例相互作用3天,与对照组比较,T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应显著减弱,上清液中干扰素(IFN)-γ/IL-4比值显著降低,IL-2水平显著降低(P0.01)。3. HMGB1介导小鼠脾脏DCreg作用的受体机制:(1)100ng/ml HMGB1刺激12小时后,DCreg表面TLR4表达显著上调(P0.01);(2)拮抗TLR4后,HMGB1刺激的DCreg分泌IL-10、IL-12水平与对照组比较变化不显著,T淋巴细胞增殖反应、功能性极化、IL-2水平亦未见显著转变(P0.05)。结论:1. HMGB1能推动IL-10的合成、释放增加,抑制IL-12的合成、释放,诱导DCreg表面共刺激分子表达减弱,HMGB1可能是诱导DCreg功能分化的重要免疫刺激信号。2. HMGB1诱导的DCreg使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应显著抑制,并推动T淋巴细胞向Th2功能性极化,抑制IL-2的合成、释放。3. HMGB1能上调DCreg受体TLR4表达,TLR4可能是参与HMGB1诱导DCreg功能分化的主要受体之一。 关键词:高迁移率族蛋白B1论文 调节性树突状细胞论文 脓毒症论文 脾T淋巴细胞论文 白介素-2论文 白介素-10论文 白介素-12论文 Toll样受体4论文 增殖反应论文 功能性极化论文
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    英文缩写表7-9

    中文摘要9-11

    Abstract11-14

    前言14-17

    第一部分 HMGB1对小鼠DCreg作用的量效-时效联系17-33

    材料与策略17-23

    一、主要试剂17-18

    二、主要仪器18-19

    三、实验策略与分组19-23

    1.小鼠脾脏调节性树突状细胞的提取和检测策略19-22

    2.流式细胞检测22

    3.实验分组及IL-1O、IL-12分泌水平检测22-23

    4.流式细胞仪检测HMGB1刺激后小鼠DCreg表面共刺激分子表达23

    四、统计学处理23

    结果23-28

    一、CD11c~(low)CD45RB~(high)DCreg在流式细胞仪的典型体现23-24

    二、HMGB1刺激与小鼠DCreg分泌IL-10、IL-12水平的联系24-26

    1.HMGB1刺激与DCreg分泌IL-10、IL-12水平变化的时间-效应联系24-25

    2.HMGB1刺激与DCreg分泌IL-10、1L-12水平变化的剂量-效应联系25-26

    三、HMGB1刺激与DCreg表面共刺激分子表达26-28

    讨论28-32

    结论32-33

    第二部分 HMGB1刺激后CD11c~(low)CD45RB~(high)DCs对T淋巴细胞免疫功能的影响33-47

    材料与策略33-38

    一、主要试剂33-35

    1.效应T细胞提取与培养33-34

    2.T细胞激活与增殖34-35

    3.ELISA检测试剂盒35

    二、主要仪器35-36

    三、实验策略36-38

    1.小鼠效应T细胞的提取和检测策略36-37

    2.T细胞增殖的检测指标及策略37-38

    3.T淋巴细胞的漂移浅析38

    四、统计学处理38

    结果38-42

    一、预实验检测淋巴细胞数与MTT吸光度值之间的联系38-39

    二、HMGB1刺激的DCreg激活脾T淋巴细胞增殖反应的转变39-40

    三、HMGB1 刺激后 DCreg 对 T 淋巴细胞的功能性极化(Th1/Th2 漂移)的影响40-41

    四、HMGB1刺激的DCreg激活脾T淋巴细胞IL-2表达的转变41-42

    讨论42-46

    结论46-47

    第三部分 HMGB1对DCreg影响T细胞功能的受体机制47-60

    材料与策略47-50

    一、主要试剂47-48

    1.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)47-48

    2.TLR4相关试剂48

    3.其他试剂48

    二、主要仪器48-49

    三、实验策略与分组49-50

    1.细胞分组和处理49-50

    2.TLR4受体封闭组的处理50

    3.RT-PCR法进行检测50

    四、统计学处理50

    结果50-56

    一、HMGB1刺激对DCreg表面TLR4表达的影响50-52

    1.流式细胞仪检测TLR4表达情况50-51

    2.PCR检测TLR4 mRNA表达51-52

    二、封闭FLR4受体后HMGB1刺激对DCreg免疫功能的影响52-56

    1.DCreg分泌IL-10、IL-12的变化52-53

    2.对T淋巴细胞增殖反应的影响53-54

    3.对T细胞功能极化的影响54-55

    4.对T淋巴细胞分泌IL-2水平的影响55-56

    讨论56-59

    结论59-60

    参考文献60-68

    文献综述一68-77

    参考文献72-77

    文献综述二77-85

    参考文献82-85

    攻读博士学位期间发表论文情况85-86

    致谢86-87

达均显著下调(P0.01)。2. HMGB1诱导的DCreg对小鼠脾T淋巴细胞功能的影响:HMGB1诱导的DCreg与T淋巴细胞以1:100的比例相互作用3天,与对照组比较,T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应显著减弱,上清液中干扰素(IFN)-γ/IL-4比值显著降低,IL-2水平显著降低(P0.01)。3. HMGB1介导小鼠脾脏DCreg作用的受体机制:(1)100ng/ml HMGB1刺激1

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