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浅析内生水葫芦内生菌的分离纯化及其代谢产物的初步论文下载中心
潜在资源,引起了国内外专家的高度重视。植物病原菌对农业生产构成了严重威胁,农药的大量利用导致化学农药残留不足日益严重,使生态环境受到了极大的破坏与污染。而植物内生菌次生代谢产物种类多、活性独特,是寻找环境友好型新型农药的宝贵资源。本论文采取组织分离法,分别从LB、PDA为分离培养基,以水葫芦的根、茎、叶部分分离
摘要:植物内生菌能够产生丰富多样的次生代谢产物,其结构新颖、功能独特、生物活性特殊,是新药物、新化合物的潜在资源,引起了国内外专家的高度重视。植物病原菌对农业生产构成了严重威胁,农药的大量利用导致化学农药残留不足日益严重,使生态环境受到了极大的破坏与污染。而植物内生菌次生代谢产物种类多、活性独特,是寻找环境友好型新型农药的宝贵资源。本论文采取组织分离法,分别从LB、PDA为分离培养基,以水葫芦的根、茎、叶部分分离内生菌,获得7株内生菌,其中包含6株细菌和1株真菌。分别应用乙酸乙酯和丙酮对7株内生菌的发酵液和菌丝体进行了粗提,利用高效液相色谱仪对乙酸乙酯相粗提物和丙酮相粗提物分别进行HPLC检测;并从4株细菌和2株农业病原菌作为供试菌株对各级粗提物进行了抑菌活性初步筛选,发现内生真菌菌株C7次生代谢产物较丰富、抑菌活性较好。并从菌株C7为探讨对象,进行次生代谢产物的分离与纯化。得出结论如下:1.内生菌的分离与鉴定:本文采取组织分离法,从LB、PDA为分离培养基,以水葫芦的根、茎、叶部分分离得到了7株内生菌,其中包含6株内生细菌和1株内生真菌。先对7株内生菌的形态特点进行了简单的观察记录,最后又对其乙酸乙酯提取物和丙酮提取物进行了高效液相色谱(HPLC)分析,结果表明该7株菌各不相同,而且代谢产物丰富程度也不同。经分子生物学鉴定菌株C7为匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)。2.7株内生菌生物活性初步筛选:用滤纸片法测定了7株内生菌C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7的乙酸乙酯相和丙酮相对2株农业病原菌和4株细菌的抑菌活性。测定结果表明C1、C2、C3、C4、C5菌株的乙酸乙酯相和丙酮相对供试菌株均无抑制性;C6菌株的乙酸乙酯相对金 葡萄球菌有微弱的抑制性,丙酮相对枯草芽孢杆菌有微弱的抑制性;C7菌株的乙酸乙酯仅对供试细菌都有一定的抑制活性。综合从上分析,本实验选择菌株C7作为后续探讨对象。3.匍枝根霉次生代谢产物和生物活性探讨:将匍枝根霉放大培养一个月,经过溶剂浸取、萃取,旋干成膏状。采取常规的硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析、制备薄层层析从及重结晶等分离办法,以C7菌丝体和发酵液的合并提取物中分离纯化出8个化合物,使用现代波谱技术鉴定其中一个化合物为(22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol。 关键词:水葫芦论文 内生菌论文 匍枝根霉论文 化学成分论文 抑菌活性论文
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    摘要8-10

    Abstract10-12

    第一章 绪论12-29

    第一节 内生菌的概述12-17

    1.1 植物内生菌的含义12-13

    1.2 植物内生菌与宿主植物的联系13-14

    1.3 植物内生菌的探讨历史及近况14-15

    1.4 植物内生菌在环境污染中的运用15

    1.5 植物内生菌次生代谢产物的探讨15-17

    第二节 水葫芦的探讨概况17-23

    2.1 水葫芦的生物学特性及分布17-18

    2.2 水葫芦的危害18-19

    2.3 水葫芦的治理19-21

    2.4 水葫芦的综合使用21-23

    第三节 水葫芦内生菌极为次生代谢产物探讨发展23

    第四节 论文探讨的背景及内容23-25

    第五节 探讨办法简介25-29

    5.1 内生菌的分离纯化技术25-26

    5.2 内生菌代谢产物提取技术26

    5.3 天然产物的分离提纯技术26-27

    5.4 高效液相色谱法(HPLC)27-28

    5.5 薄层色谱法(TLC)28

    5.6 结构鉴定技术28-29

    第二章 水葫芦内生菌的分离纯化29-32

    第一节 材料与办法29-30

    1.1 实验材料29

    1.2 主要实验器材29

    1.3 实验办法29-30

    第二节 实验结果与分析30-31

    第三节 小结与讨论31-32

    第三章 水葫芦内生菌粗提物化学筛选和抑菌活性筛选32-43

    第一节 水葫芦内生菌的化学筛选32-38

    1.1 实验材料与仪器32

    1.2 实验办法32-33

    1.3 结果与讨论33-38

    第二节 水葫芦内生菌的抑菌活性测定38-42

    2.1 实验材料与仪器38-40

    2.2 实验办法40-41

    2.3 结果与讨论41-42

    第三节 小结与讨论42-43

    第四章 水葫芦内生真菌的鉴定极为代谢产物的探讨43-66

    第一节 水葫芦内生真菌的鉴定43-44

    第二节 改良 PDB 培养基条件下内生真菌谢产物的分离纯化44-48

    2.1 实验材料44-45

    2.2 实验办法45-48

    第三节 大米培养基条件下真菌代谢产物的化学分析48-60

    3.1 实验材料48

    3.2 实验办法48-49

    3.3 结果与分析49-60

    第四节 内生真菌代谢产物各组分的抑

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