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浅论意义血管紧张素转化酶2胶原及其限速亚单位P4Hα1的作用和机制毕业设计论文模板
其中,α亚基决定其生物活性,足量的P4Hα1可从推动胶原蛋白的合成,而P4Hα1表达的降低也可相应减少胶原蛋白的含量。在人体内,肾素-血管紧张素体系与动脉粥样硬化的发生进展密切相关。其中,血管紧张素II(AngII)可从引起血管收缩,血管平滑肌细胞增殖肥大从及诱导炎症反应的产生。有关探讨已经证明AngII可从抑制P4Hα1的活性和降
摘要:背景胶原是人体中细胞外基质(ECM)中主要的结构蛋白,其中I型和III型胶原蛋白是血管壁结构中最常见的胶原蛋白亚型,其分泌和降解的平衡是维持细胞外基质正常,增多动脉斑块稳定从及降低血管壁破裂的重要因素。众所周知,4羟基-脯氨酸羟化酶(P4H)对于胶原蛋白的生物合成具有重要意义,它是一个具有两个α亚基和两个β亚基的四聚体,其中,α亚基决定其生物活性,足量的P4Hα1可从推动胶原蛋白的合成,而P4Hα1表达的降低也可相应减少胶原蛋白的含量。在人体内,肾素-血管紧张素体系与动脉粥样硬化的发生进展密切相关。其中,血管紧张素II(AngII)可从引起血管收缩,血管平滑肌细胞增殖肥大从及诱导炎症反应的产生。有关探讨已经证明AngII可从抑制P4Hα1的活性和降低胶原的合成从破坏ECM的结构,以而导致斑块的不稳定和破裂。在肾素血管紧张素体系中的另一物质血管紧张素转化酶2(ACE2),具有与AngII的反意义,可发挥很强的抗炎症反应意义,并可推动胶原的合成从及斑块的稳定,而且可将AngII水解为血管紧张素(1-7)(Ang(1-7)),后者作为AngII的内源性拮抗因子,可与AngII产生对抗意义。目的1.在体外实验中,观察ACE2是否可从推动P4Hα1的表达并增多胶原蛋白含量。2.在体外实验中,探讨并研究ACE2对于P4Hα1从及胶原合成的意义机制和途径。办法ACE2重组腺病毒的制备我们通过AdMax体系制备携带ACE2的重组腺病毒(AdACE2)从及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的重组腺病毒(AdEGFP)。对细胞的预处理我们用10-6mol/L的AngII刺激平滑肌细胞24小时。24小时候再对细胞进行分组刺激。对细胞的刺激我们用106pfu AdEGFP刺激细胞24小时从及用相同剂量的AdACE2刺激细胞24,48,72小时来探讨ACE2对P4Hα1的意义。为了探讨Ang(1-7)的意义,在时间效应实验中,我们用10-6mol/L的Ang(1-7)刺激细胞2,4,8,16,24小时;在剂量效应实验中,我们用10-5mol/L,10-6mol/L从及10-7mol/L的Ang(1-7)分别刺激细胞24小时。接下来,为了分析ACE2的意义机制,我们用Ang(1-7)的抑制剂A779来作比较,将实验分为六组,每组刺激24小时,除了ACE2为106pfu外, Ang(1-7)和A779都是10-6mol/L,具体分组为对照组, AdACE2组,AdACE2+A779组,Ang(1-7)组,Ang(1-7)+A779组和A779组。实时定量RT-PCR细胞刺激结束后,我们提取细胞的RNA并进行逆转录,利用实时定量RT-PCR检测P4Hα1的mRNA含量,并通过β-actin的CT值进行校准。Western blot我们提取经过刺激的细胞的蛋白质后,通过进行凝胶电泳,转膜,谈后标记一抗和二抗,进而曝光,最后可从观察到目的蛋白的表达。ELISA我们将细胞的上清液提取出来从后,利用ELISA试剂盒分析得出胶原蛋白I和III的表达含量。结果ACE2推动P4Hα1的表达在时间效应实验中,我们用106pfu AdACE2分别刺激细胞24,48,72小时,通过RT-PCR我们发现24小时后,P4Hα1的表达最强烈,显著高于其他各组,到48小时时表达已降低,72小时与48小时时差异不大,但都高于对照组从及AdEGFP组。Ang(1-7)增多P4Hα1的表达对于Ang(1-7)对P4Hα1的意义效果,在时间效应实验中,我们用10-6mol/L的Ang(1-7)刺激细胞2,4,8,16,24小时,发现其效果随时间逐步上升并在24小时时达到最高且显著高于对照组;在剂量效应实验中,我们用10-5mol/L,10-6mol/L从及10-7mol/L的Ang(1-7)分别刺激细胞24小时,结果显示,其意义效果随浓度的上升而上升,在其后的实验中,我们选取10-6mol/L作为Ang(1-7)的意义浓度。A779抑制ACE2和Ang(1-7)对于P4Hα1的意义为了探讨ACE2对于P4Hα1的意义机制,我们除了用AdACE2和Ang(1-7)刺激细胞外,还利用了Ang(1-7)的抑制剂A779与两者混合刺激。根据RT-PCR从及Western的结果,单纯Ang(1-7)的刺激

中,血管紧张素II(AngII)可从引起血管收缩,血管平滑肌细胞增殖肥大从及诱导炎症反应的产生。有关探讨已经证明AngII可从抑制P4Hα1的活性和降低胶原的合成从破坏ECM的结构,以而导致斑块的不稳定和破裂。在肾素血管紧张素体系中的另一物质血管紧张素转化酶2(ACE2),具有与AngII的反意义,可发挥很强的抗炎症反应意义,并可推动胶原

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